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liulianwei

铁虫 (初入文坛)

[交流] Sau 3AI 酶切DNA片段 无带怎么回事? 已有4人参与

大家好,我现在在做微卫星标记的开发,第一步就是DNA片段的酶切,内切酶为Sau 3AI ,1ul,10×H Buffer 2 ul , DNA片段量(做了梯度),加水补足20ul。37°消化4h,然后65°10min,(后来又试了80°20min)终止反应,内切酶后来也换新的,电解液也换新的,DNA模板检测了也没有问题,连续做了5次,电泳还是没有带。现在实在是分析不出来原因,请大家多多指点啊,谢谢!我也没有金币啦,第一次在上面求助,希望大家多多帮助啊!
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redlizi

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
多少体系?加多少基因组来酶切,又是用的多少来电泳检测?电泳时可用等量未酶切的来对照,很可能是酶切的比较完全,量又太少,所以看不出来了
4楼2012-02-18 09:32:53
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
是没有切开还是切的没有条带了?上图吧,问题都没有描述清楚。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2012-02-17 23:01:34
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liulianwei

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by brightfuture01 at 2012-02-17 23:01:34:
是没有切开还是切的没有条带了?上图吧,问题都没有描述清楚。

跑电泳什么也没有啊,就是没有带啊
3楼2012-02-18 01:31:19
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liulianwei

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by redlizi at 2012-02-18 09:32:53:
多少体系?加多少基因组来酶切,又是用的多少来电泳检测?电泳时可用等量未酶切的来对照,很可能是酶切的比较完全,量又太少,所以看不出来了

20ul体系,DNA(0.5ul/1ul2个梯度,DNA亮度还行,以前跑pcr的时候0.5ul就能跑出片段),最后全部用来电泳,准备切胶啊。“等量的未酶切来对照,”指的是DNA模板吗。“很可能是酶切的比较完全,量又太少,所以看不出来了。”意思是DNA模板少了?
5楼2012-02-18 10:07:59
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