应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Sau 3AI 酶切DNA片段 无带怎么回事？
81/1返回列表
查看: 2010  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liulianwei

铁虫 (初入文坛)

[交流] Sau 3AI 酶切DNA片段 无带怎么回事？ 已有4人参与

大家好,我现在在做微卫星标记的开发，第一步就是DNA片段的酶切,内切酶为Sau 3AI ，1ul，10×H Buffer 2 ul , DNA片段量（做了梯度），加水补足20ul。37°消化4h，然后65°10min,(后来又试了80°20min)终止反应，内切酶后来也换新的，电解液也换新的，DNA模板检测了也没有问题，连续做了5次，电泳还是没有带。现在实在是分析不出来原因，请大家多多指点啊，谢谢！我也没有金币啦，第一次在上面求助，希望大家多多帮助啊！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
宥
1楼 2012-02-17 20:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
是没有切开还是切的没有条带了？上图吧，问题都没有描述清楚。
赞一下 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2012-02-17 23:01:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liulianwei

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by brightfuture01 at 2012-02-17 23:01:34:
是没有切开还是切的没有条带了？上图吧，问题都没有描述清楚。

跑电泳什么也没有啊，就是没有带啊
赞一下 回复此楼
宥
3楼2012-02-18 01:31:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

redlizi

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
多少体系？加多少基因组来酶切，又是用的多少来电泳检测？电泳时可用等量未酶切的来对照，很可能是酶切的比较完全，量又太少，所以看不出来了
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-18 09:32:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liulianwei

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by redlizi at 2012-02-18 09:32:53:
多少体系？加多少基因组来酶切，又是用的多少来电泳检测？电泳时可用等量未酶切的来对照，很可能是酶切的比较完全，量又太少，所以看不出来了

20ul体系，DNA（0.5ul/1ul2个梯度，DNA亮度还行，以前跑pcr的时候0.5ul就能跑出片段），最后全部用来电泳，准备切胶啊。“等量的未酶切来对照，”指的是DNA模板吗。“很可能是酶切的比较完全，量又太少，所以看不出来了。”意思是DNA模板少了？
赞一下 回复此楼
宥
5楼2012-02-18 10:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by liulianwei at 2012-02-18 10:07:59:
20ul体系，DNA（0.5ul/1ul2个梯度，DNA亮度还行，以前跑pcr的时候0.5ul就能跑出片段），最后全部用来电泳，准备切胶啊。“等量的未酶切来对照，”指的是DNA模板吗。“很可能是酶切的比较完全，量又太少，所以看不 ...

酶加过了，切的时间太长了。你要知道Sau3AI 是四碱基识别酶。理论上，基因组上平均256bp就有一个酶切位点，如果切的时间太长，酶加太多的话，切成弥散的火箭状了。
赞一下 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
6楼2012-02-18 10:29:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

森林有木

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你家的模板太少啦，电泳点样估计你也点的很少所以看不出来
赞一下 回复此楼
笑笑别人 笑笑自己
7楼2012-03-05 15:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

他她0328

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1.酶量太大，这个酶是10U/ul，你的体系是20ul，加10U的酶，量确实过大。
2.酶切时间太久，我回收的片段大些，酶切时间几分钟就好了，而且酶浓度是0.01U/ug，所以建议你适当缩短酶切时间，降低酶浓度。
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-06 13:35:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liulianwei 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +3 大火山小火山 2026-03-16 5/250 2026-03-16 16:54 by barlinike
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭