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liulianwei

铁虫 (初入文坛)

[交流] Sau 3AI 酶切DNA片段 无带怎么回事?已有4人参与

大家好,我现在在做微卫星标记的开发,第一步就是DNA片段的酶切,内切酶为Sau 3AI ,1ul,10×H Buffer 2 ul , DNA片段量(做了梯度),加水补足20ul。37°消化4h,然后65°10min,(后来又试了80°20min)终止反应,内切酶后来也换新的,电解液也换新的,DNA模板检测了也没有问题,连续做了5次,电泳还是没有带。现在实在是分析不出来原因,请大家多多指点啊,谢谢!我也没有金币啦,第一次在上面求助,希望大家多多帮助啊!
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他她0328

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1.酶量太大,这个酶是10U/ul,你的体系是20ul,加10U的酶,量确实过大。
2.酶切时间太久,我回收的片段大些,酶切时间几分钟就好了,而且酶浓度是0.01U/ug,所以建议你适当缩短酶切时间,降低酶浓度。
8楼2012-03-06 13:35:50
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