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shihongling

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求平末端的连接体系！ 已有5人参与

如题，平末端连接一直连不上，是不是体系有什么要求吗？跟粘性末端连接体系有什么不同？谢谢！
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1楼 2011-04-11 21:33:55
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励分享经验 2011-04-12 11:06:00
引用回帖:
Originally posted by shihongling at 2011-04-11 21:33:55:
如题，平末端连接一直连不上，是不是体系有什么要求吗？跟粘性末端连接体系有什么不同？谢谢！

体系差不多的，酶稍微多加点，还有更重要的一个是连接温度更低，连接时间更长，我们用4°C/16h。
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2楼2011-04-12 08:41:16
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by shihongling at 2011-04-11 21:33:55:
如题，平末端连接一直连不上，是不是体系有什么要求吗？跟粘性末端连接体系有什么不同？谢谢！

平末端没有特殊的连接体系，可以适当的多加点连接酶和延长连接时间。如果还不行建议你同时做两份涂板的时候全涂到一块板子里。还可以换个公司的连接酶或者换感受态细胞试一下，最后一招用电转，再不行的话没辙了

[ Last edited by 空谷幽风 on 2011-4-12 at 14:03 ]
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-04-12 14:02:35
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gbrillia

银虫 (小有名气)
如果是平末端的话你的载体浓一些，20ng/ul以上，片段和载体的比在5:1，而且一些公司的连接酶平末端和粘性末端连接的体系是不同的，我们用的是fermenters，20微升体系中加入2ul的50%PEG4000，5ul连接酶。
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4楼2011-04-12 15:18:21
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yuwang86
5楼2011-04-12 15:23:45
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475502411

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我的是粘性末端链接，最近也是连不上，不知道是什么问题，希望各位赐教
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
6楼2011-04-12 15:24:24
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