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shihongling

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求平末端的连接体系! 已有5人参与

如题,平末端连接一直连不上,是不是体系有什么要求吗?跟粘性末端连接体系有什么不同?谢谢!
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励分享经验 2011-04-12 11:06:00
引用回帖:
Originally posted by shihongling at 2011-04-11 21:33:55:
如题,平末端连接一直连不上,是不是体系有什么要求吗?跟粘性末端连接体系有什么不同?谢谢!

体系差不多的,酶稍微多加点,还有更重要的一个是连接温度更低,连接时间更长,我们用4°C/16h。
2楼2011-04-12 08:41:16
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空谷幽风

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by shihongling at 2011-04-11 21:33:55:
如题,平末端连接一直连不上,是不是体系有什么要求吗?跟粘性末端连接体系有什么不同?谢谢!

平末端没有特殊的连接体系,可以适当的多加点连接酶和延长连接时间。如果还不行建议你同时做两份涂板的时候全涂到一块板子里。还可以换个公司的连接酶或者换感受态细胞试一下,最后一招用电转,再不行的话没辙了

[ Last edited by 空谷幽风 on 2011-4-12 at 14:03 ]
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-04-12 14:02:35
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gbrillia

银虫 (小有名气)

如果是平末端的话你的载体浓一些,20ng/ul以上,片段和载体的比在5:1,而且一些公司的连接酶平末端和粘性末端连接的体系是不同的,我们用的是fermenters,20微升体系中加入2ul的50%PEG4000,5ul连接酶。
4楼2011-04-12 15:18:21
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5楼2011-04-12 15:23:45
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475502411

铜虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我的是粘性末端链接,最近也是连不上,不知道是什么问题,希望各位赐教
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
6楼2011-04-12 15:24:24
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