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临风7071

木虫 (正式写手)

[求助] pcr末端加A

各位，我用高保真的酶pcr，产物无A，先要加A，请问，我纯化后的pcr产物，加taq+dATP+Buffer，那么我需要加MgCl2吗？
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-06-06 20:48:09
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hxinzheng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-06-06 21:27:29
临风7071(金币+1): 2011-06-07 19:05:48
看用什么taq酶，看taq酶buffer中有没有加过Mgcl2，我们一般用rtaq，有时也用Extaq，buffer中都有Mgcl2
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2楼2011-06-06 21:08:47
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

临风7071(金币+1): 2011-06-07 19:05:52
taq酶买来的时候不是都带了buffer了吗？就用人家带的就好了。 跟做PCR几乎一样，就是反应是只一步而已。反应时间尽量长点（比如1h），保证反应完全。
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摒气动方息，宁神心自明。
3楼2011-06-07 08:10:10
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

临风7071(金币+1): 2011-06-07 19:05:57
有的Taq给到的是Mg单独一管不在Buffer里的，所以要看买到是啥Taq酶了。
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4楼2011-06-07 12:22:15
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

临风7071(金币+1): 2011-06-07 19:06:01
不同公司的聚合酶的buffer是不一样的，有的公司已加了氯化镁，有的没加，你要看看你用的这个酶的说明书，就清楚要不要加了。
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5楼2011-06-07 17:06:48
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临风7071

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hxinzheng at 2011-06-06 21:08:47:
看用什么taq酶，看taq酶buffer中有没有加过Mgcl2，我们一般用rtaq，有时也用Extaq，buffer中都有Mgcl2

我买的takara的rtaq，buffer中不带Mgcl2，所以我应该加Mgcl2是吧？
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6楼2011-06-07 19:05:32
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amilie030312

金虫 (正式写手)
如果Buffer中不带Mg离子的产品包装中肯定会给你带一管Mg离子单独加的。
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7楼2011-06-08 12:29:52
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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3, EPI+1): Good！ 2011-06-08 15:28:54
呵呵，这个问题，你按照普通的PCR做就可以，就是在你最后延伸10min的时候，加入普通rTAQ，就可以了，就是这么简单。
当然了，还有更好的办法，就是你直接购买全式金的pEASY-Blunt载体（记得索要配送的Top10感受态），可以直接把你的平端片段亚克隆到载体上去，这样你就没有必要加什么A尾了，话说我已经不加A尾好多年了，呵呵。
祝，好运
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8楼2011-06-08 15:16:55
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