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574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR产物平末端化问题已有2人参与

我要做PCR产物和载体一个平末端一个粘性末端的连接,先将PCR产物用T4 DNA聚合酶削去A尾,然后再用另一个内切酶切割,实现一个平端一个粘性末端,现在有一个问题是T4 DNA聚合酶处理平端之后还要不要胶回收再用另一个内切酶切割,如果胶回收的话可能浓度就很低了,因为实验中一共进行好几次回收,如果不回收的话又怕前一步的反应影响后续实验,大家有没有做过的?给个建议
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ytetyio09

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-26 09:50:55
可以试试这篇论文的方法,虽然是个小的改进,但是值得一试,而且很方便:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
5楼2014-03-25 18:58:50
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