应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » DNA回收产物浓度一般是多少？
121/2返回列表12下一页
查看: 10909  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

呀薯条

金虫 (小有名气)

[求助] DNA回收产物浓度一般是多少？ 已有5人参与

我需要做DNA与克隆载体的连接，用的是Takara的克隆载体，做了几次一直没有连接成功，通过微量测定仪，测定DNA在PCR后经电泳切胶回收的产物是12纳克每微升，最终没有连接成功，与DNA浓度太低有关吗？最终筛选用的是蓝白斑筛选吗？我是直接用抗生素培养基筛选，是不是对结果也会有影响。。求指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-10 10:43:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

上官尹悠

金虫 (职业作家)
我上次回收的浓度是108，是不是有点高

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(2人) 回复此楼
努力，追求自己的追求！
10楼2014-04-14 11:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:43:06
不用蓝白斑筛选，没那个必要，连接转化做好了就OK

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-04-10 12:23:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

信仰爱

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我感觉影响不大，挺好连接的，昨天还做了下，成功了。
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-10 11:16:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woolley

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:42:53
“DNA在PCR后经电泳切胶回收的产物是12纳克每微升”
由于切胶回收的试剂中含有胍盐，所以使用OD260测定的浓度会不准确
看你是直接连接，没有进行酶切，你做的应该是TA连接吧
连接反应主要看的是载体和片段的比例，你可以尝试降低载体的浓度，多试验几个浓度梯度
如果是TA连接的话，还要注意你的PCR产物是不是有A接头，一般只有Taq系列的酶PCR产物有A接头，其他高保真的酶都是平末端，PCR之后需要用Taq等加A
蓝白斑筛选只是为了让结果可视化，你用抗生素筛选之后还要PCR检测等确认一下，二者没有本质的差别
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-10 11:19:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:44:03
洗脱时用水比较好

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-10 12:22:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

geneyhh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:44:16
12有点低，2O以上没问题，胶回收时离心时间25s即可，我习惯用OmEga的盒子，回收的效率较高！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-04-10 12:32:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaopangge

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-10 13:52:16
呀薯条: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-04-11 09:39:46
12ug有点低，一般在50以上，转化效率较高，蓝白斑筛选和青霉素筛选可以一起做的，转化失败的是蓝班，成功的是白斑。
赞一下 回复此楼
7楼2014-04-10 12:58:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by woolley at 2014-04-10 11:19:21
“DNA在PCR后经电泳切胶回收的产物是12纳克每微升”
由于切胶回收的试剂中含有胍盐，所以使用OD260测定的浓度会不准确
看你是直接连接，没有进行酶切，你做的应该是TA连接吧
连接反应主要看的是载体和片段的比例 ...

我用的就是taq酶，那个DNA产物回收后，一般可以在零下20度保存多久啊
赞一下 回复此楼
8楼2014-04-11 09:42:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woolley

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 呀薯条 at 2014-04-11 09:42:59
我用的就是taq酶，那个DNA产物回收后，一般可以在零下20度保存多久啊...

不反复冻融的话，应该能放个半年以上吧
具体没有测试过
赞一下 回复此楼
9楼2014-04-14 10:36:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 呀薯条 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 C79jjtjAKjEn 2026-09-15 3/150 2026-09-18 03:42 by cITaGg3p5edr
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-18 02:30 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-18 02:16 by cITaGg3p5edr
[基金申请] 国社科系统bug了，是不是要放榜了？ +5 kynobel 2026-09-16 6/300 2026-09-17 21:37 by tosogo
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 5BDX0d0WFp7t 2026-09-15 4/200 2026-09-17 16:29 by 0ngsZVSCTS7z
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:27 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:15 by ObVzqQQh1rrE
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-17 13:17 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 11:27 by UAIjTRMuUFoj
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 05:16 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:28 by k06BKNblrGRH
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-17 03:52 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:04 by Tql5LQhh5rLK
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 02:35 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:14 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:47 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭