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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 跪求大神指点PCR产物浓度分析
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Camille2010

金虫 (小有名气)

[求助] 跪求大神指点PCR产物浓度分析

如题所示，做这个的目的是想要知道PCR产物的浓度，使用的模板DNA136bp,100ng/ul, 1ul, 不对称PCR 反应体系每管50ul，4管，反应产物取其中20ul稀释1/10后进行梯度琼脂糖凝胶电泳，电泳结果如图所示，Marker往右依次是1ul-5ul，请教大侠，如果只用Marker DNA 对比跑胶结果能大概计算出PCR中模板DNA的浓度么？谢谢
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    • 2013-02-19 05:19:18, 2.99 M

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1楼 2013-02-19 05:19:47
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回帖置顶 ( 共有1个 )

wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking: 回帖置顶 2013-02-19 19:50:32
Camille2010: 金币+2 2013-02-20 01:53:01
引用回帖:
5楼: Originally posted by Camille2010 at 2013-02-19 16:22:55
我的实验不是主要关于PCR的,主要做分析化学,做这个是想 获得些 模板DNA,同事告诉我他就是这样做的,我不是很理解所以来问问...

楼主的模版大小其实不是特别的大，可以考虑委托公司的进行序列全合成，费用应该不是很贵的，这样按照服务公司的说明，溶解稀释到楼主想要的浓度，不就行了吗
可以试试的
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风雪夜归人
7楼2013-02-19 18:36:57
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普通回帖

reninhat

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Camille2010: 金币+2 2013-02-19 16:12:06
用个紫外检测板，测一下DNA浓度吧。有需要可以联系我哦
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2楼2013-02-19 08:44:32
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Camille2010: 金币+2 2013-02-19 16:12:41
我想了解楼主的整个实验，关于楼主说的这个方法，没有见过有文献报道，可能是我孤陋寡闻，但是通过电泳来相对定量的倒是有见过
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风雪夜归人
3楼2013-02-19 08:51:51
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majily

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-02-19 13:35:29
Camille2010: 金币+2 2013-02-19 16:23:36
只通过有marker对照的电泳结果不能看出 你可以加一个定好量的阳性对照 能根据亮度相对估计一下 但是不保准 最好做一下荧光定量PCR或将条带割胶回收测定DNA浓度，除去损失的话能相对准确的估计一下DNA的含量。
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既然选择了远方就要在风雨中飞翔
4楼2013-02-19 11:12:15
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Camille2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wqj1988926 at 2013-02-19 08:51:51
我想了解楼主的整个实验，关于楼主说的这个方法，没有见过有文献报道，可能是我孤陋寡闻，但是通过电泳来相对定量的倒是有见过

我的实验不是主要关于PCR的,主要做分析化学,做这个是想 获得些 模板DNA,同事告诉我他就是这样做的,我不是很理解所以来问问
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5楼2013-02-19 16:22:55
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Camille2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by majily at 2013-02-19 11:12:15
只通过有marker对照的电泳结果不能看出 你可以加一个定好量的阳性对照 能根据亮度相对估计一下 但是不保准 最好做一下荧光定量PCR或将条带割胶回收测定DNA浓度，除去损失的话能相对准确的估计一下DNA的含量。

谢谢.如果知道Marker DNA 每个条带相对应的ug,能不能估算PCR产物浓度呢 ?
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6楼2013-02-19 16:41:48
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Camille2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wqj1988926 at 2013-02-19 18:36:57
楼主的模版大小其实不是特别的大，可以考虑委托公司的进行序列全合成，费用应该不是很贵的，这样按照服务公司的说明，溶解稀释到楼主想要的浓度，不就行了吗
可以试试的...

我也以为是可以用公司合成的，因为用的其他DNA都是合成好的，不过就这个不知道为什么需要自己扩增确定浓度，今天又问了一下，就是对比一下不同量的Marker  DNA 和不同量的PCR产物相似亮度的条带，然后估算模板DNA的浓度，不是一个很精确的方法。
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8楼2013-02-20 01:52:42
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majily

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
Camille2010: 金币+2 2013-02-20 15:43:09
引用回帖:
6楼: Originally posted by Camille2010 at 2013-02-19 16:41:48
谢谢.如果知道Marker DNA 每个条带相对应的ug,能不能估算PCR产物浓度呢 ?...

如果你确实像这样的话 那就计算一下吧 勉强的估计一下 呵呵 还从来没这么做过 跑电泳的时候 一定重新换电泳液 防止其他干扰导致结果更不准确了
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既然选择了远方就要在风雨中飞翔
9楼2013-02-20 10:13:10
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Camille2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by majily at 2013-02-20 10:13:10
如果你确实像这样的话 那就计算一下吧 勉强的估计一下 呵呵 还从来没这么做过 跑电泳的时候 一定重新换电泳液 防止其他干扰导致结果更不准确了...

谢谢
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10楼2013-02-20 15:43:42
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