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yln819

新虫 (正式写手)

[求助] 质粒,PCR产物双酶切后胶回收不回来?求大神指导! 已有9人参与

我质粒、PCR产物双酶切后回收不回来,切胶的时候质粒是用了五个泳道的胶,pcr用了三个泳道的,可回收后还是没有条带!求指导!谢谢!
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wolovexiehe

铁虫 (初入文坛)

是不是片段太多,回收柱子不合适
即使失去一切,也不失去微笑
3楼2014-06-27 10:52:47
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

引用回帖:
9楼: Originally posted by yln819 at 2014-06-27 11:49:46
宽带试过一次,加的没你这么多,没纯化出来,我再试一下宽带

试剂盒刚买的应该没问题的...

一般割胶回收,效果差,大多数是两个,一个本身浓度不够,另一个是试剂盒问题
我有一次上样100ul一个孔哈哈
天行健
13楼2014-06-27 15:00:19
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普通回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yln819: 金币+2, 有帮助 2014-06-27 10:59:01
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-06-27 12:06:36
你质粒,PCR产物大约切了多少的量?
质粒多大?  载体骨架多大?   PCR产物多大?
下次把跑胶后的那个要切的胶图挂上来看看。
祝早成功。
2楼2014-06-27 10:49:45
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yln819

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-27 10:49:45
你质粒,PCR产物大约切了多少的量?
质粒多大?  载体骨架多大?   PCR产物多大?
下次把跑胶后的那个要切的胶图挂上来看看。
祝早成功。

质粒加了1ul,PCR产物3ul,酶1ul;质粒3000bp,PCR1000多bp
4楼2014-06-27 10:58:46
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yln819

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wolovexiehe at 2014-06-27 10:52:47
是不是片段太多,回收柱子不合适

我也试过就两个泳道一块回收,以及一个,PCR 产物纯化的时候可以,酶切就回收不回来,酶切后的带有的不是很亮,这个有关系吗?
5楼2014-06-27 11:03:44
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yln819 at 2014-06-27 10:58:46
质粒加了1ul,PCR产物3ul,酶1ul;质粒3000bp,PCR1000多bp...

质粒加了1ul,PCR产物3ul。
那质粒有多少ug?   pcr产物多少ug?
6楼2014-06-27 11:07:14
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yln819 at 2014-06-27 10:58:46
质粒加了1ul,PCR产物3ul,酶1ul;质粒3000bp,PCR1000多bp...

你质粒切完后要回收的那段是多少bp?
7楼2014-06-27 11:07:50
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yln819: 金币+3, 有帮助 2014-06-27 11:40:12
yln819: 金币+2 2014-06-27 16:08:01
一般情况下,我跑宽胶,一个孔上样至少40ul以上,而且亮度要求很高,否则回收效果很一般

当然,你看下试剂盒过期了没
天行健
8楼2014-06-27 11:09:30
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yln819

新虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-27 11:09:30
一般情况下,我跑宽胶,一个孔上样至少40ul以上,而且亮度要求很高,否则回收效果很一般

当然,你看下试剂盒过期了没

宽带试过一次,加的没你这么多,没纯化出来,我再试一下宽带

试剂盒刚买的应该没问题的
9楼2014-06-27 11:49:46
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yln819

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-27 11:07:50
你质粒切完后要回收的那段是多少bp?...

接近3000bp,多少ug没有计算,这个必须算着加吗?
10楼2014-06-27 11:51:08
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