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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒，PCR产物双酶切后胶回收不回来？求大神指导！
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yln819

新虫 (正式写手)

[求助] 质粒，PCR产物双酶切后胶回收不回来？求大神指导！ 已有9人参与

我质粒、PCR产物双酶切后回收不回来，切胶的时候质粒是用了五个泳道的胶，pcr用了三个泳道的，可回收后还是没有条带！求指导！谢谢！
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1楼 2014-06-27 10:12:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wolovexiehe

铁虫 (初入文坛)
是不是片段太多，回收柱子不合适
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即使失去一切，也不失去微笑
3楼2014-06-27 10:52:47
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主
引用回帖:
9楼: Originally posted by yln819 at 2014-06-27 11:49:46
宽带试过一次，加的没你这么多，没纯化出来，我再试一下宽带

试剂盒刚买的应该没问题的...

一般割胶回收，效果差，大多数是两个，一个本身浓度不够，另一个是试剂盒问题
我有一次上样100ul一个孔哈哈
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天行健
13楼2014-06-27 15:00:19
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yln819: 金币+2, ★有帮助 2014-06-27 10:59:01
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-27 12:06:36
你质粒，PCR产物大约切了多少的量？
质粒多大？  载体骨架多大？   PCR产物多大？
下次把跑胶后的那个要切的胶图挂上来看看。
祝早成功。
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2楼2014-06-27 10:49:45
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yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-27 10:49:45
你质粒，PCR产物大约切了多少的量？
质粒多大？  载体骨架多大？   PCR产物多大？
下次把跑胶后的那个要切的胶图挂上来看看。
祝早成功。

质粒加了1ul，PCR产物3ul，酶1ul；质粒3000bp，PCR1000多bp
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4楼2014-06-27 10:58:46
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yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wolovexiehe at 2014-06-27 10:52:47
是不是片段太多，回收柱子不合适

我也试过就两个泳道一块回收，以及一个，PCR 产物纯化的时候可以，酶切就回收不回来,酶切后的带有的不是很亮，这个有关系吗？
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5楼2014-06-27 11:03:44
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yln819 at 2014-06-27 10:58:46
质粒加了1ul，PCR产物3ul，酶1ul；质粒3000bp，PCR1000多bp...

质粒加了1ul，PCR产物3ul。
那质粒有多少ug?   pcr产物多少ug？
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6楼2014-06-27 11:07:14
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yln819 at 2014-06-27 10:58:46
质粒加了1ul，PCR产物3ul，酶1ul；质粒3000bp，PCR1000多bp...

你质粒切完后要回收的那段是多少bp？
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7楼2014-06-27 11:07:50
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yln819: 金币+3, ★有帮助 2014-06-27 11:40:12
yln819: 金币+2 2014-06-27 16:08:01
一般情况下，我跑宽胶，一个孔上样至少40ul以上，而且亮度要求很高，否则回收效果很一般

当然，你看下试剂盒过期了没
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天行健
8楼2014-06-27 11:09:30
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yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-27 11:09:30
一般情况下，我跑宽胶，一个孔上样至少40ul以上，而且亮度要求很高，否则回收效果很一般

当然，你看下试剂盒过期了没

宽带试过一次，加的没你这么多，没纯化出来，我再试一下宽带

试剂盒刚买的应该没问题的
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9楼2014-06-27 11:49:46
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yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-27 11:07:50
你质粒切完后要回收的那段是多少bp？...

接近3000bp,多少ug没有计算，这个必须算着加吗？
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10楼2014-06-27 11:51:08
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