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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒，PCR产物双酶切后胶回收不回来？求大神指导！
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yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-27 12:07:08
yln819: 金币+2, ★有帮助 2014-06-27 12:52:22
yln819: 金币+2, ★有帮助 2014-06-27 16:07:41
最后一步洗脱的时候要确保洗脱液加到吸附膜上，本身柱子回收就会损失很多的。
再就是溶胶的时候要充分
祝早成功
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11楼2014-06-27 11:58:10
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yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yzj926521 at 2014-06-27 11:58:10
最后一步洗脱的时候要确保洗脱液加到吸附膜上，本身柱子回收就会损失很多的。
再就是溶胶的时候要充分
祝早成功

恩恩，谢谢！确定加到吸附膜上了，用的双蒸水。
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12楼2014-06-27 12:53:23
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主
引用回帖:
9楼: Originally posted by yln819 at 2014-06-27 11:49:46
宽带试过一次，加的没你这么多，没纯化出来，我再试一下宽带

试剂盒刚买的应该没问题的...

一般割胶回收，效果差，大多数是两个，一个本身浓度不够，另一个是试剂盒问题
我有一次上样100ul一个孔哈哈
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天行健
13楼2014-06-27 15:00:19
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yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-27 15:00:19
一般割胶回收，效果差，大多数是两个，一个本身浓度不够，另一个是试剂盒问题
我有一次上样100ul一个孔哈哈...

恩恩，下次我试试看！谢谢
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14楼2014-06-27 16:07:30
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yln819 at 2014-06-27 11:03:44
我也试过就两个泳道一块回收，以及一个，PCR 产物纯化的时候可以，酶切就回收不回来,酶切后的带有的不是很亮，这个有关系吗？...

请问，，  你的质粒是怎么提取的呢，，，我最近在提取质粒  总是 提取的 是基因组DNA
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12
15楼2014-06-27 17:40:50
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yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-27 17:40:50
请问，，  你的质粒是怎么提取的呢，，，我最近在提取质粒  总是 提取的 是基因组DNA
...

就是在抗性平板跟摇管中培养后用试剂盒提的呀，你怎么确定是基因组DNA？是跑的marker？
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16楼2014-06-27 19:10:15
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yln819: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-28 12:52:42
跑胶看不到不代表没有，也可能是浓度太低的缘故，可以尝试连接，其实连接也不需要太高的浓度
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17楼2014-06-27 19:47:24
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by yln819 at 2014-06-27 19:10:15
就是在抗性平板跟摇管中培养后用试剂盒提的呀，你怎么确定是基因组DNA？是跑的marker？...

有 4-5 条带，   而且比 质粒 碱基对要大，    质粒在 6000左右，，  条带 都是在  10000以上的 了，    让老师看了下，， 说这不是 质粒  ，是基因组
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12
18楼2014-06-28 08:42:44
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yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-28 08:42:44
有 4-5 条带，   而且比 质粒 碱基对要大，    质粒在 6000左右，，  条带 都是在  10000以上的 了，    让老师看了下，， 说这不是 质粒  ，是基因组...

我们老师说质粒跑胶是没法看碱基的，是随意动的，位置不确定，你可以切了再看看吧
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19楼2014-06-28 12:51:55
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yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by aayqaa at 2014-06-27 19:47:24
跑胶看不到不代表没有，也可能是浓度太低的缘故，可以尝试连接，其实连接也不需要太高的浓度

恩恩，我尝试了下，还没验证.你试过吗？
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20楼2014-06-28 12:54:10
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