应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒，PCR产物双酶切后胶回收不回来？求大神指导！
504/5返回列表上一页12345下一页
查看: 4329  |  回复: 49
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

匿名

用户注销 (正式写手)

Thomas_HT
本帖仅楼主可见
赞一下
31楼2014-06-30 21:57:02
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
30楼: Originally posted by 手指缠胶带 at 2014-06-30 21:52:59
你回收不好   浪费的试剂  这钱都够测序用的了   还不一定有结果   这不是耽误事么？...

导师不这么认为呀，而且测出来不对不也浪费钱吗
赞一下 回复此楼
32楼2014-07-01 00:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
31楼: Originally posted by 手指缠胶带 at 2014-06-30 21:57:02
要是你坚持回收的话  在每步离心前   考虑静置一会（多静置1min-3min）试下     让其溶解充分   离心时洗脱和最后回收就充分  回收的结果可能会好点...

好的，我试一下看看，你一般都是测序吗？
赞一下 回复此楼
33楼2014-07-01 00:19:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

Thomas_HT
★ ★
yln819: 金币+2, ★有帮助 2014-07-01 11:17:06
本帖仅楼主可见
赞一下
34楼2014-07-01 08:32:03
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (正式写手)

Thomas_HT
本帖仅楼主可见
赞一下
35楼2014-07-01 08:36:07
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
35楼: Originally posted by 手指缠胶带 at 2014-07-01 08:36:07
你回收损失太多   然后没结果   但是测序可能出有结果   ；而且测序也得自己比对    错了也能看出来啊   但是我们不是至少能减少损失那一步骤了嘛...

是那么回事，但老师不会那么想的。。。
赞一下 回复此楼
36楼2014-07-01 11:16:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smdsfy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yln819: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-07-01 16:11:08
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-03 12:13:48
制胶、电泳、电泳缓冲液、核酸染料的量、琼脂糖的浓度、跑完胶看否看得见，若条带很弱就没有没收的必要，做分子实验要注意细节，有的时候你可能会觉得莫名其妙，重复不出来，实际上是自己的粗心大意，在每一个环节上都不要掉以轻心，即使你做了很久很熟练也不要偷懒，按标准操作规程做，除非有经验比你丰富的予以指导，可以做修改。
关于胶回收我曾经也遇到到写问题，我想需注意以下几点：（个人意见，仅供参考）
1.质粒的量足够 1~2ug，载体的酶切我习惯做CIP，降低自连率
2.PCR多做几管，做小体系就行，比如10ul，PCR完后可以一起跑胶挖胶纯化，胶尽量倒薄些，切胶尽量切少些，但要把目的条带全包括，纯化的时候第一步溶胶要彻底，溶完胶待冷却至常温再挂柱，洗脱的时候，洗脱液65°加热下，这些按说明书上来就行。洗脱体积尽量小些，我一般25ul。纯化后取2ul跑胶看有没有东西，若没有就不要做酶切了，重来
关于PCR产物还有另一种方案，比如10ul体系，P4管，完了合并，取2ul跑胶看有没有目的条带，有就把剩余38ul用PCR清洁试剂盒回收，不需要溶胶这一步，快，回收后取2ul跑胶检测你的目的条带是否还在，可能有杂带，不要紧，有目的条带就行，继续酶切，酶切后跑胶，切胶纯化，把酶切的目的条带回收出来就行，记住每一步最好跑胶看一下，以免重头再来 啊
回收时比较关键的步骤，步步检验，出现问题马上重来，相信自己肯定能做出来，没问题的，加油！
赞一下 回复此楼
37楼2014-07-01 15:49:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

Thomas_HT
本帖仅楼主可见
赞一下
38楼2014-07-01 15:50:03
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

yln819

新虫 (正式写手)
引用回帖:
37楼: Originally posted by smdsfy at 2014-07-01 15:49:54
制胶、电泳、电泳缓冲液、核酸染料的量、琼脂糖的浓度、跑完胶看否看得见，若条带很弱就没有没收的必要，做分子实验要注意细节，有的时候你可能会觉得莫名其妙，重复不出来，实际上是自己的粗心大意，在每一个环节上 ...

恩恩，好详细呀，谢谢
赞一下 回复此楼
39楼2014-07-01 16:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smdsfy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
39楼: Originally posted by yln819 at 2014-07-01 16:11:02
恩恩，好详细呀，谢谢...

不客气
回复此楼
40楼2014-07-03 09:40:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yln819 的主题更新
504/5返回列表上一页12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 10:46 by 1Nb0IVlmV6v0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 10:35 by 1Nb0IVlmV6v0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 10:32 by 1Nb0IVlmV6v0
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-11 10:24 by 1Nb0IVlmV6v0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 10:21 by 1Nb0IVlmV6v0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 7/350 2026-11-11 10:04 by 1Nb0IVlmV6v0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 4/200 2026-11-11 08:34 by 1Nb0IVlmV6v0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 07:06 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:29 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 03:56 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-11 00:59 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭