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匿名

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Thomas_HT

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31楼2014-06-30 21:57:02
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yln819

新虫 (正式写手)

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30楼: Originally posted by 手指缠胶带 at 2014-06-30 21:52:59
你回收不好   浪费的试剂  这钱都够测序用的了   还不一定有结果   这不是耽误事么?...

导师不这么认为呀,而且测出来不对不也浪费钱吗
32楼2014-07-01 00:16:47
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yln819

新虫 (正式写手)

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31楼: Originally posted by 手指缠胶带 at 2014-06-30 21:57:02
要是你坚持回收的话  在每步离心前   考虑静置一会(多静置1min-3min)试下     让其溶解充分   离心时洗脱和最后回收就充分  回收的结果可能会好点...

好的,我试一下看看,你一般都是测序吗?
33楼2014-07-01 00:19:06
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匿名

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Thomas_HT

★ ★
yln819: 金币+2, 有帮助 2014-07-01 11:17:06
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34楼2014-07-01 08:32:03
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匿名

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Thomas_HT

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35楼2014-07-01 08:36:07
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yln819

新虫 (正式写手)

引用回帖:
35楼: Originally posted by 手指缠胶带 at 2014-07-01 08:36:07
你回收损失太多   然后没结果   但是测序可能出有结果   ;而且测序也得自己比对    错了也能看出来啊   但是我们不是至少能减少损失那一步骤了嘛...

是那么回事,但老师不会那么想的。。。
36楼2014-07-01 11:16:58
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smdsfy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yln819: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-07-01 16:11:08
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-03 12:13:48
制胶、电泳、电泳缓冲液、核酸染料的量、琼脂糖的浓度、跑完胶看否看得见,若条带很弱就没有没收的必要,做分子实验要注意细节,有的时候你可能会觉得莫名其妙,重复不出来,实际上是自己的粗心大意,在每一个环节上都不要掉以轻心,即使你做了很久很熟练也不要偷懒,按标准操作规程做,除非有经验比你丰富的予以指导,可以做修改。
关于胶回收我曾经也遇到到写问题,我想需注意以下几点:(个人意见,仅供参考)
1.质粒的量足够 1~2ug,载体的酶切我习惯做CIP,降低自连率
2.PCR多做几管,做小体系就行,比如10ul,PCR完后可以一起跑胶挖胶纯化,胶尽量倒薄些,切胶尽量切少些,但要把目的条带全包括,纯化的时候第一步溶胶要彻底,溶完胶待冷却至常温再挂柱,洗脱的时候,洗脱液65°加热下,这些按说明书上来就行。洗脱体积尽量小些,我一般25ul。纯化后取2ul跑胶看有没有东西,若没有就不要做酶切了,重来
关于PCR产物还有另一种方案,比如10ul体系,P4管,完了合并,取2ul跑胶看有没有目的条带,有就把剩余38ul用PCR清洁试剂盒回收,不需要溶胶这一步,快,回收后取2ul跑胶检测你的目的条带是否还在,可能有杂带,不要紧,有目的条带就行,继续酶切,酶切后跑胶,切胶纯化,把酶切的目的条带回收出来就行,记住每一步最好跑胶看一下,以免重头再来 啊
回收时比较关键的步骤,步步检验,出现问题马上重来,相信自己肯定能做出来,没问题的,加油!
37楼2014-07-01 15:49:54
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匿名

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Thomas_HT

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38楼2014-07-01 15:50:03
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yln819

新虫 (正式写手)

引用回帖:
37楼: Originally posted by smdsfy at 2014-07-01 15:49:54
制胶、电泳、电泳缓冲液、核酸染料的量、琼脂糖的浓度、跑完胶看否看得见,若条带很弱就没有没收的必要,做分子实验要注意细节,有的时候你可能会觉得莫名其妙,重复不出来,实际上是自己的粗心大意,在每一个环节上 ...

恩恩,好详细呀,谢谢
39楼2014-07-01 16:11:02
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smdsfy

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
39楼: Originally posted by yln819 at 2014-07-01 16:11:02
恩恩,好详细呀,谢谢...

不客气
40楼2014-07-03 09:40:39
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