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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助大神们 CDNA片段PCR扩增之后没有目的条带 全是拖带
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200806773

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神们 CDNA片段PCR扩增之后没有目的条带 全是拖带 已有9人参与

图在下面 每次扩增出来都是这个样子 已知CNDA 引物是没有问题的
      现在是不是模板的量出了问题 模板用了2ul，引物各2ul，PCR mix 25ul，dd水19ul  体系是50的
      目的条带应该在1900bp左右，是不是PCR的时候模板的量太大的样子？
      筛引物的时候引物都是好的 是不是得现在调整一下退火温度》？

求助大神们 CDNA片段PCR扩增之后没有目的条带 全是拖带
CDNA PCR F1 F8 F9 F11 F12.jpg


求助大神们 CDNA片段PCR扩增之后没有目的条带 全是拖带-1
F1-F12 pcr.jpg
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1楼 2014-07-16 11:15:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

代德艳

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉因该加大引物的量
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5楼2014-07-16 15:38:45
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普通回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 13:02:31
非特异性很强的样子，升升退火温度试试，可以拉梯度，或者温度梯度PCR
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我会绕一个圈，走回到实验室
2楼2014-07-16 12:48:39
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怎么都行

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.9kb的产物长度，你每个循环延伸那步骤至少应该2min，不知道是不是这么做的？
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3楼2014-07-16 13:09:14
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董庄青年

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人感觉   应适量加大引物与模板的量
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4楼2014-07-16 13:56:10
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200806773

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 怎么都行 at 2014-07-16 13:09:14
1.9kb的产物长度，你每个循环延伸那步骤至少应该2min，不知道是不是这么做的？

72度那里吗 2min30s
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6楼2014-07-24 17:53:09
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200806773

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 董庄青年 at 2014-07-16 13:56:10
个人感觉   应适量加大引物与模板的量

有一次将模板量加大 直接加了10ul模板 扩出来了 但后来引物加大也不行 模板加大也不行 模板的OD 1.78 浓度2500左右 是不是引物的问题啊 大神
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7楼2014-07-24 17:54:27
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古木宁天

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

退火温度再高一些，试试吧，不行可以考虑换模板。
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懒
8楼2014-07-24 18:08:10
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看起来像是降解，或者是cDNA过量。之前用过这个引物扩增么？
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
9楼2014-07-24 20:06:35
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引物设计的怎么样？退火多少？用什么设计的？

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2014-07-24 21:08:36
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