24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1176  |  回复: 3

pao_pao_

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR出现的条带不清晰,拖带。请教中~~

做PCR了一段时间,可是换了新的引物的情况下,出现了这样一个问题。特来请教。
下面是退火温度梯度的条带图。
每个底物在六个温度下进行了PCR,如图前六个孔是同一个底物,退火温度依次是54、58、、60、62、64、68 摄氏度;
后面六个孔是第二个样本的温度梯度条带。
这样的情况下可能是因为退火温度的问题么?还是什么呢?
我的PCR体系已经用了很久、是20ul的体系,之前的条带一直都很清晰,这次新引物就出现了这样的问题。
PCR出现的条带不清晰,拖带。请教中~~
PCR-BSM梯度-1.gif
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
pao_pao_(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-24 09:47:34
可能是引物特异性不好。你的目的条带是多大?
2楼2013-05-24 02:09:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pao_pao_

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-24 02:09:34
可能是引物特异性不好。你的目的条带是多大?

目的条带是800bp。marker是100-600共六条。引物是参考文献的,不应该有问题啊。不知和退火温度是否有关呢。
3楼2013-05-27 09:42:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 很有道理哈 2013-05-28 08:23:37
引用回帖:
3楼: Originally posted by pao_pao_ at 2013-05-27 09:42:55
目的条带是800bp。marker是100-600共六条。引物是参考文献的,不应该有问题啊。不知和退火温度是否有关呢。...

参考文献的引物也不一定就非常好,效果如何要自己实验才知道。总的来说,退火温度高的话,特异性提高,下面的小带也少了。说明引物很可能与模板其它位置的序列anealing。PCR的效果不好还可能与模板的质量有关。
4楼2013-05-28 07:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pao_pao_ 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +6 AZMK 2026-04-05 10/500 2026-04-06 17:45 by lijunpoly
[考研] 0703化学 +18 妮妮ninicgb 2026-04-04 20/1000 2026-04-06 17:38 by 妮妮ninicgb
[考研] 一志愿武理车辆专硕总分 281 求调剂 +3 上岸研究生. 2026-04-02 3/150 2026-04-06 16:46 by 小月儿呀呀
[考研] 070300化学279求调剂 +16 哈哈哈^_^ 2026-03-31 19/950 2026-04-06 14:14 by 无际的草原
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +11 zyx上岸! 2026-04-05 11/550 2026-04-05 22:13 by dongzh2009
[考研] 材料工程302分求调剂 +9 zyx上岸! 2026-04-04 9/450 2026-04-05 22:08 by 醉翁wl
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-03-30 10/500 2026-04-05 17:57 by jj987
[考研] 材料专硕 调剂 +14 CXN123456 2026-04-03 14/700 2026-04-05 17:18 by Hdyxbekcb
[考研] 电子信息调剂交叉学科有推荐吗 +6 jhtfeybgj 2026-04-01 9/450 2026-04-05 11:13 by 猪会飞
[考研] 283求调剂 +4 mcbbc 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:51 by imissbao
[考研] 调剂 +9 19945159693 2026-04-03 10/500 2026-04-04 20:16 by dongzh2009
[考研] 348分环境工程·调剂 +10 吴彦祖24k 2026-04-03 11/550 2026-04-04 14:19 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +11 勇敢的小吴 2026-04-02 11/550 2026-04-03 21:46 by qlm5820
[考研] 数二英二348求调剂 +4 hxdzj1 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:25 by zhq0425
[考研] 301求调剂 +14 A_JiXing 2026-04-01 14/700 2026-04-03 18:31 by ls刘帅
[考研] 266分,一志愿电气工程,本科材料,求材料专业调剂 +9 哇呼哼呼哼 2026-04-02 9/450 2026-04-03 12:05 by 1753564080
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-01 12/600 2026-04-02 09:15 by olim
[考研] 08生物与医药专硕初试346找调剂 +6 dianeeee 2026-04-01 7/350 2026-04-02 08:23 by guoweigw
[考研] 292求调剂 +17 木虫er12138 2026-04-01 17/850 2026-04-01 21:37 by 七度不信任
信息提示
请填处理意见