应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR出现的条带不清晰，拖带。请教中~~
41/1返回列表
查看: 1471  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pao_pao_

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR出现的条带不清晰，拖带。请教中~~

做PCR了一段时间，可是换了新的引物的情况下，出现了这样一个问题。特来请教。
下面是退火温度梯度的条带图。
每个底物在六个温度下进行了PCR，如图前六个孔是同一个底物，退火温度依次是54、58、、60、62、64、68 摄氏度；
后面六个孔是第二个样本的温度梯度条带。
这样的情况下可能是因为退火温度的问题么？还是什么呢？
我的PCR体系已经用了很久、是20ul的体系,之前的条带一直都很清晰，这次新引物就出现了这样的问题。
PCR出现的条带不清晰，拖带。请教中~~
PCR-BSM梯度-1.gif
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-23 18:54:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
pao_pao_(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-24 09:47:34
可能是引物特异性不好。你的目的条带是多大？
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-24 02:09:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pao_pao_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-24 02:09:34
可能是引物特异性不好。你的目的条带是多大？

目的条带是800bp。marker是100-600共六条。引物是参考文献的，不应该有问题啊。不知和退火温度是否有关呢。
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-27 09:42:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 很有道理哈 2013-05-28 08:23:37
引用回帖:
3楼: Originally posted by pao_pao_ at 2013-05-27 09:42:55
目的条带是800bp。marker是100-600共六条。引物是参考文献的，不应该有问题啊。不知和退火温度是否有关呢。...

参考文献的引物也不一定就非常好，效果如何要自己实验才知道。总的来说，退火温度高的话，特异性提高，下面的小带也少了。说明引物很可能与模板其它位置的序列anealing。PCR的效果不好还可能与模板的质量有关。
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-28 07:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pao_pao_ 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭