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xiehe018

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gyesang

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xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:06
你是什么酶扩增你这个基因的啊,有这么多突变,估计你用的taq,建议用高保真酶PCR,比如用Pfu,KOD之类的酶
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-06-24 17:05:19
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古月木木

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-06-24 19:36:10
master保真度一般,建议用EXtaq,LAtaq都可以,扩片段的时候避免突变或替换或gap
3楼2014-06-24 17:33:18
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xiehe018

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4楼2014-06-24 17:35:54
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xiehe018

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5楼2014-06-24 18:24:44
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Neo2000

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-06-24 19:36:23
这个mix我也用,你的循环数太多了吧,那么短的片段应该很容易搞定啊,文献中的序列也要怀疑下,你可以做个多序列比对分析下你自己的那五个样

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-06-24 18:38:38
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a50044758

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xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:17
你这样的情况就要换酶了,不要纠结了,对于1000左右的片段PCR,taq酶的扩增效率是最好的,如果高保真酶扩不出来是正常的,PFU和primerstar的扩增效率远低于TAQ酶,这个我做过对比的。
你可以试试phanta EVO 高保真酶或者phusion高保真酶,效率和taq酶差不多,略低一点点,你加上那个PCR enhance buffer 效率会提高不少。
7楼2014-06-25 08:50:01
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xiehe018

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8楼2014-06-25 09:12:36
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xiehe018

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9楼2014-06-25 09:45:07
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yzj926521

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xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:25
PrimeSTAR酶的保真性高于Ex-Taq,LA-Taq酶一般适用于长片段的扩增。
还有另一种可能考虑:所扩增的这片段中本身是不是就存在SNP呢
10楼2014-06-25 10:13:15
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