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xiehe018

禁虫 (小有名气)
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1楼2014-06-24 15:49:04
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:17
你这样的情况就要换酶了，不要纠结了，对于1000左右的片段PCR，taq酶的扩增效率是最好的，如果高保真酶扩不出来是正常的，PFU和primerstar的扩增效率远低于TAQ酶，这个我做过对比的。
你可以试试phanta EVO 高保真酶或者phusion高保真酶，效率和taq酶差不多，略低一点点，你加上那个PCR enhance buffer 效率会提高不少。
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7楼2014-06-25 08:50:01
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a50044758

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xiehe018 at 2014-06-25 09:45:07
我还想要问一下，你用的是Phusion DNA Polymerase吗？那PCR enhancer buffer用普通的buffer行吗？还有dNTP等都各加多少量呀？麻烦你把你用的体系发给我一下呗！谢谢啦！
...

就是正常的PCR体系，说明书里面有，你可以看说明书，如果弄丢了去网上下一个。http://www.thermoscientificbio.c ... ity-pcr-master-mix/
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13楼2014-06-25 10:56:32
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:56
引用回帖:
9楼: Originally posted by xiehe018 at 2014-06-25 09:45:07
我还想要问一下，你用的是Phusion DNA Polymerase吗？那PCR enhancer buffer用普通的buffer行吗？还有dNTP等都各加多少量呀？麻烦你把你用的体系发给我一下呗！谢谢啦！
...

就是正常的PCR反应体系，网上有说明书的。http://www.thermoscientificbio.c ... ity-pcr-master-mix/
照着说明书配体系就行。
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14楼2014-06-25 10:57:45
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a50044758

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by xiehe018 at 2014-06-25 11:03:51
哦，你是用的Mastermix呀！
...

我用的不是mix，发错你了，我建议你用国产的若唯赞的phanta高保真酶，效果比phusion好些。
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18楼2014-06-25 11:37:04
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