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xiehe018

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1楼 2014-06-24 15:49:04
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gyesang

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xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:06
你是什么酶扩增你这个基因的啊，有这么多突变，估计你用的taq，建议用高保真酶PCR，比如用Pfu，KOD之类的酶
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-06-24 17:05:19
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古月木木

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-24 19:36:10
master保真度一般，建议用EXtaq，LAtaq都可以，扩片段的时候避免突变或替换或gap
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3楼2014-06-24 17:33:18
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xiehe018

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4楼2014-06-24 17:35:54
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xiehe018

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5楼2014-06-24 18:24:44
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Neo2000

木虫 (著名写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-24 19:36:23
这个mix我也用，你的循环数太多了吧，那么短的片段应该很容易搞定啊，文献中的序列也要怀疑下，你可以做个多序列比对分析下你自己的那五个样

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6楼2014-06-24 18:38:38
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a50044758

银虫 (小有名气)

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xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:17
你这样的情况就要换酶了，不要纠结了，对于1000左右的片段PCR，taq酶的扩增效率是最好的，如果高保真酶扩不出来是正常的，PFU和primerstar的扩增效率远低于TAQ酶，这个我做过对比的。
你可以试试phanta EVO 高保真酶或者phusion高保真酶，效率和taq酶差不多，略低一点点，你加上那个PCR enhance buffer 效率会提高不少。
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7楼2014-06-25 08:50:01
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xiehe018

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8楼2014-06-25 09:12:36
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xiehe018

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9楼2014-06-25 09:45:07
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yzj926521

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xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:25
PrimeSTAR酶的保真性高于Ex-Taq，LA-Taq酶一般适用于长片段的扩增。
还有另一种可能考虑：所扩增的这片段中本身是不是就存在SNP呢
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10楼2014-06-25 10:13:15
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