应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 郁闷，郁闷。。。
192/2返回列表上一页12
查看: 2777  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiehe018

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
11楼2014-06-25 10:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曾文正公

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:42
这么短的片段有这么多突变 缺失一定得用高保真酶了  像primeStar  至于你说用高保真酶扩不出来  我觉得可能是因为：1.目的基因的表达丰度太低，建议换一个目的基因表达量高的cDNA做模板。2. 引物设计的问题  引物的GC含量怎么样？加的哪个酶的酶切位点？加保护碱基了吗？加了多少个？  想到的就这些  祝楼主好运   
赞一下 回复此楼
只有非常努力，才能看起来毫不费力
12楼2014-06-25 10:48:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a50044758

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xiehe018 at 2014-06-25 09:45:07
我还想要问一下，你用的是Phusion DNA Polymerase吗？那PCR enhancer buffer用普通的buffer行吗？还有dNTP等都各加多少量呀？麻烦你把你用的体系发给我一下呗！谢谢啦！
...

就是正常的PCR体系，说明书里面有，你可以看说明书，如果弄丢了去网上下一个。http://www.thermoscientificbio.c ... ity-pcr-master-mix/
赞一下 回复此楼
13楼2014-06-25 10:56:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:56
引用回帖:
9楼: Originally posted by xiehe018 at 2014-06-25 09:45:07
我还想要问一下，你用的是Phusion DNA Polymerase吗？那PCR enhancer buffer用普通的buffer行吗？还有dNTP等都各加多少量呀？麻烦你把你用的体系发给我一下呗！谢谢啦！
...

就是正常的PCR反应体系，网上有说明书的。http://www.thermoscientificbio.c ... ity-pcr-master-mix/
照着说明书配体系就行。
赞一下 回复此楼
14楼2014-06-25 10:57:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

54808455

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:35:06
两个问题
1.扩增用的模板是什么？基因组还是cDNA？举个例子：克隆陆地棉基因（异源四倍体），基因就有可能存在4种序列（存在SNP)。
2.PrimeSTAR扩增效率还行，一般都能扩增出来，换下质量好的模板试一试。
还不行的话，换下pfuUltra II Fusion HS DNA polymerase。
赞一下 回复此楼
15楼2014-06-25 10:58:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiehe018

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
16楼2014-06-25 11:03:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiehe018

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
17楼2014-06-25 11:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a50044758

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by xiehe018 at 2014-06-25 11:03:51
哦，你是用的Mastermix呀！
...

我用的不是mix，发错你了，我建议你用国产的若唯赞的phanta高保真酶，效果比phusion好些。
赞一下 回复此楼
18楼2014-06-25 11:37:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
19楼2018-07-28 16:04:36
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiehe018 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +14 yaoyewhu2008 2026-08-20 14/700 2026-08-20 09:19 by littlezl
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 125/6250 2026-08-20 09:02 by 医学老男孩
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭