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xiehe018

禁虫 (小有名气)
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1楼2014-06-24 15:49:04
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曾文正公

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:42
这么短的片段有这么多突变 缺失一定得用高保真酶了  像primeStar  至于你说用高保真酶扩不出来  我觉得可能是因为：1.目的基因的表达丰度太低，建议换一个目的基因表达量高的cDNA做模板。2. 引物设计的问题  引物的GC含量怎么样？加的哪个酶的酶切位点？加保护碱基了吗？加了多少个？  想到的就这些  祝楼主好运   
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只有非常努力，才能看起来毫不费力
12楼2014-06-25 10:48:33
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
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xiehe018(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:34:06
你是什么酶扩增你这个基因的啊，有这么多突变，估计你用的taq，建议用高保真酶PCR，比如用Pfu，KOD之类的酶
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-06-24 17:05:19
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古月木木

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-24 19:36:10
master保真度一般，建议用EXtaq，LAtaq都可以，扩片段的时候避免突变或替换或gap
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3楼2014-06-24 17:33:18
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xiehe018

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2014-06-24 17:35:54
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