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DNA回收产物浓度一般是多少？ 已有5人参与
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| 我需要做DNA与克隆载体的连接，用的是Takara的克隆载体，做了几次一直没有连接成功，通过微量测定仪，测定DNA在PCR后经电泳切胶回收的产物是12纳克每微升，最终没有连接成功，与DNA浓度太低有关吗？最终筛选用的是蓝白斑筛选吗？我是直接用抗生素培养基筛选，是不是对结果也会有影响。。求指导 |
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9楼2014-04-14 10:36:55
2楼2014-04-10 11:16:55
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:42:53
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呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:42:53
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“DNA在PCR后经电泳切胶回收的产物是12纳克每微升” 由于切胶回收的试剂中含有胍盐，所以使用OD260测定的浓度会不准确 看你是直接连接，没有进行酶切，你做的应该是TA连接吧 连接反应主要看的是载体和片段的比例，你可以尝试降低载体的浓度，多试验几个浓度梯度 如果是TA连接的话，还要注意你的PCR产物是不是有A接头，一般只有Taq系列的酶PCR产物有A接头，其他高保真的酶都是平末端，PCR之后需要用Taq等加A 蓝白斑筛选只是为了让结果可视化，你用抗生素筛选之后还要PCR检测等确认一下，二者没有本质的差别 |
3楼2014-04-10 11:19:21
Neo2000
木虫 (著名写手)
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4楼2014-04-10 12:22:18