| 查看: 10807 | 回复: 11 | |||
[求助]
DNA回收产物浓度一般是多少？ 已有5人参与
|
|||
| 我需要做DNA与克隆载体的连接，用的是Takara的克隆载体，做了几次一直没有连接成功，通过微量测定仪，测定DNA在PCR后经电泳切胶回收的产物是12纳克每微升，最终没有连接成功，与DNA浓度太低有关吗？最终筛选用的是蓝白斑筛选吗？我是直接用抗生素培养基筛选，是不是对结果也会有影响。。求指导 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有260人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR结果不好，胶回收后浓度很低
已经有10人回复
- 小片段DNA的回收问题
已经有19人回复
- DNA浓度太低怎么办
已经有6人回复
- 请问做普通PCR要用多大浓度的DNA?
已经有14人回复
- 切胶回收过程有可能对DNA造成损伤吗？
已经有9人回复
- 如何在切胶回收的DNA片段两端添加P32标记呢？
已经有5人回复
- 跪求大神指点PCR产物浓度分析
已经有12人回复
- 若回收胶，跑电泳应加多少样品
已经有15人回复
- pcr产物胶回收浓度低，能不能和T载体连接
已经有16人回复
- 原核表达载体的构建
已经有37人回复
- dna切胶回收中各试剂的作用
已经有14人回复
- 胶的浓度多少为好？我一般用1%，有没有问题啊？
已经有10人回复
- 谁做过乙醇沉淀法浓缩DNA呀？离心之后能用肉眼看到DNA吗？
已经有24人回复
- PCR产物回收之后跑胶浓度过低
已经有17人回复
- 天跟胶回收试剂盒老是回收不成功
已经有18人回复
- 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！
已经有9人回复
- 【求助/交流】如何提高DNA的浓度
已经有6人回复
- 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收，为什么回收率太低！
已经有53人回复
10楼2014-04-14 11:23:56
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2014-04-10 12:23:20
2楼2014-04-10 11:16:55
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:42:53
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:42:53
|
“DNA在PCR后经电泳切胶回收的产物是12纳克每微升” 由于切胶回收的试剂中含有胍盐，所以使用OD260测定的浓度会不准确 看你是直接连接，没有进行酶切，你做的应该是TA连接吧 连接反应主要看的是载体和片段的比例，你可以尝试降低载体的浓度，多试验几个浓度梯度 如果是TA连接的话，还要注意你的PCR产物是不是有A接头，一般只有Taq系列的酶PCR产物有A接头，其他高保真的酶都是平末端，PCR之后需要用Taq等加A 蓝白斑筛选只是为了让结果可视化，你用抗生素筛选之后还要PCR检测等确认一下，二者没有本质的差别 |
3楼2014-04-10 11:19:21
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2014-04-10 12:22:18
6楼2014-04-10 12:32:54
xiaopangge
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 499
- 散金: 472
- 红花: 1
- 帖子: 197
- 在线: 86.1小时
- 虫号: 1334993
- 注册: 2011-06-30
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学与生殖生物学
7楼2014-04-10 12:58:14
8楼2014-04-11 09:42:59
9楼2014-04-14 10:36:55
