| 查看: 2245 | 回复: 14 | ||||
[求助]
从琼脂糖凝胶中回收DNA
|
||||
| PCR扩增以后进行2%琼脂糖凝胶，切下340bp左右的目的片段后，如何回收DNA，希望有经验的虫子给点具体的建议 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 生物资料 | 专业 |
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有166人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
琼脂糖凝胶电泳
已经有20人回复- DNA琼脂糖凝胶电泳所需DNA的最低浓度
已经有6人回复
- 【求助/交流】DNA提取问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】琼脂糖凝胶DNA电泳失败
已经有7人回复
- 【求助/交流】凝胶电泳
已经有12人回复
- 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收，为什么回收率太低！
已经有53人回复
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
几种PCR 产物回收的详方法和步骤 1) 普通胶回收 如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。 2) 从低熔点凝胶回收DNA 纯化DNA片段 加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5分钟保温，使凝胶完全溶解。待放至室温，加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3分钟离心。反复1-2次。取上层液，加0.1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积无水乙醇，进行乙醇沉淀。将纯化的DNA加适量TE溶解，测定含量，备用（可用于目的基因结构分析，探针制备等）。 3) 扩增特异性好的PCR回收 如果PCR扩增特异性好，只是简单的PCR产物纯化回收，可以在PCR产物中加入50ug／ml 的蛋白酶K，37度1h，酚／氯仿抽提一次，氯仿抽提一次，上清加入0.1体积的醋酸钠，2.5体积的无水乙醇沉淀回收。 |
14楼2012-08-18 19:37:47
2楼2012-08-17 16:40:37
dshlove
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 17
- 应助: 237 (大学生)
- 金币: 4764.7
- 散金: 20
- 红花: 10
- 帖子: 852
- 在线: 419.2小时
- 虫号: 1609389
- 注册: 2012-02-10
- 性别: GG
- 专业: 污染控制化学
3楼2012-08-17 16:41:54
woshizhufeng
新虫 (小有名气)
- 应助: 34 (小学生)
- 金币: 8.4
- 红花: 1
- 帖子: 298
- 在线: 115.3小时
- 虫号: 1310932
- 注册: 2011-05-30
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
4楼2012-08-17 17:33:23
烟涛微茫
铁杆木虫 (文坛精英)
卡牌大师
- 应助: 56 (初中生)
- 金币: 7695.5
- 散金: 2662
- 红花: 95
- 沙发: 465
- 帖子: 17285
- 在线: 1303.2小时
- 虫号: 1935281
- 注册: 2012-08-12
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
用回收试剂盒就可以回收DNA
5楼2012-08-17 19:59:43
6楼2012-08-17 20:07:18
yesucao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 3877.1
- 散金: 45
- 红花: 6
- 帖子: 374
- 在线: 203.4小时
- 虫号: 810829
- 注册: 2009-07-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2012-08-17 21:59:34
hutingting
银虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 175
- 散金: 92
- 红花: 1
- 帖子: 358
- 在线: 58.8小时
- 虫号: 739432
- 注册: 2009-04-03
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
8楼2012-08-18 09:09:25
9楼2012-08-18 09:31:44
zy晨曦
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2258.4
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 205
- 在线: 77.5小时
- 虫号: 1755080
- 注册: 2012-04-14
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
10楼2012-08-18 10:22:05