【答案】应助回帖

11楼2012-08-18 11:52:07

xiongyaoling

金虫 (小有名气)

应助: 11 (小学生)
金币: 1056.2
散金: 50
红花: 1
帖子: 109
在线: 33小时
虫号: 1267368
注册: 2011-04-16
性别: MM
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我们实验室都用天根的试剂盒，按说明书操作就可以。很好用的！

12楼2012-08-18 18:10:47

aofeng860308

木虫 (正式写手)

应助: 53 (初中生)
金币: 3661.4
散金: 145
红花: 5
帖子: 497
在线: 531.1小时
虫号: 938003
注册: 2010-01-06
性别: GG
专业: 环境分析化学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

直接使用Gel Extract Kit就可以啊，这个算是最常规的胶回收了。

13楼2012-08-18 19:23:34

生物-TJAB

新虫 (小有名气)

应助: 11 (小学生)
金币: 213.1
红花: 1
帖子: 82
在线: 28.4小时
虫号: 1613354
注册: 2012-02-12
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

几种PCR 产物回收的详方法和步骤

1) 普通胶回收

如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。

2) 从低熔点凝胶回收DNA

纯化DNA片段加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5分钟保温，使凝胶完全溶解。待放至室温，加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3分钟离心。反复1-2次。取上层液，加0.1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积无水乙醇，进行乙醇沉淀。将纯化的DNA加适量TE溶解，测定含量，备用（可用于目的基因结构分析，探针制备等）。

3) 扩增特异性好的PCR回收

如果PCR扩增特异性好，只是简单的PCR产物纯化回收，可以在PCR产物中加入50ug／ml 的蛋白酶K，37度1h，酚／氯仿抽提一次，氯仿抽提一次，上清加入0.1体积的醋酸钠，2.5体积的无水乙醇沉淀回收。

赞一下(1人)

14楼2012-08-18 19:37:47

liuxiuaza

金虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 963.6
红花: 1
帖子: 422
在线: 88.9小时
虫号: 1449658
注册: 2011-10-18
性别: MM
专业: 基因组学

引用回帖:

2楼: Originally posted by 小qiang at 2012-08-17 16:40:37
现在不是都用回收试剂盒吗？

都是自己配的试剂，不让用试剂盒

15楼2012-08-20 11:55:52