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caolvchong

银虫 (小有名气)

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用试剂盒啊,试剂盒上的说明书里把每个步骤都讲解的很详细啊,so easy
11楼2012-08-18 11:52:07
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们实验室都用天根的试剂盒,按说明书操作就可以。很好用的!
12楼2012-08-18 18:10:47
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
直接使用Gel Extract Kit就可以啊,这个算是最常规的胶回收了。
13楼2012-08-18 19:23:34
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生物-TJAB

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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几种PCR 产物回收的详方法和步骤

1) 普通胶回收

如果要胶回收,最好还是用试剂盒,方便,回收率也略高,实在要手工回收,可以切胶后加入3倍体积TE,水浴熔化后,酚、酚/氯仿抽提干净,乙醇沉淀即可。另外好像还有冷冻法,没作过,不是很清楚。

2) 从低熔点凝胶回收DNA

纯化DNA片段 加与凝胶体积相等的TE(10mmol/l Tris-HCl pH8.0,0.1mmol/l EDTA),置65℃水浴5分钟保温,使凝胶完全溶解。待放至室温,加等量酚(TE饱和,TE封在上层,取下层酚),轻轻混匀(不用混匀),12000rpm,3分钟离心。反复1-2次。取上层液,加0.1体积3mol/L醋酸钠(pH5.2)和2.5倍体积无水乙醇,进行乙醇沉淀。将纯化的DNA加适量TE溶解,测定含量,备用(可用于目的基因结构分析,探针制备等)。

3) 扩增特异性好的PCR回收

如果PCR扩增特异性好,只是简单的PCR产物纯化回收,可以在PCR产物中加入50ug/ml 的蛋白酶K,37度1h,酚/氯仿抽提一次,氯仿抽提一次,上清加入0.1体积的醋酸钠,2.5体积的无水乙醇沉淀回收。
14楼2012-08-18 19:37:47
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小qiang at 2012-08-17 16:40:37
现在不是都用回收试剂盒吗?

都是自己配的试剂,不让用试剂盒
15楼2012-08-20 11:55:52
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