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王有朝

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA提取问题

藻类全基因组DNA粗提取后进行电泳，想看看到底有没有提到DNA。之前测得
A280 = 0.467
A260 = 0.949
A230 = 0.373
A260/ A280 = 2.03
A260/ A230 = 2.55
浓度：C = 47.4ng/µL
1%琼脂糖凝胶电泳，结果电泳Marker跑出来了，但是未看到我所提的DNA条带，那是什么原因？
求解！！！
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1楼 2011-03-30 16:56:23
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314243568

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流！ 2011-04-10 19:09:03
配胶可能用去离子水配了，没有用TAE,一般的maker在去离子水里配的胶里是可以跑出来的，但是目的条带就跑不出来，或是效果很差！全从胶上面跑入缓冲液中了。或是DNA酶污染了。
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2楼2011-04-10 11:56:46
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
没有看到操作过程这个很难说哦~~
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3楼2011-04-10 12:37:29
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smiled001

禁虫 (小有名气)
王有朝(金币+2): 哦，谢谢你。乙醇挥发不干净会导致样品从上样孔跑出来吗？ 2011-04-12 15:22:28
本帖内容被屏蔽
4楼2011-04-10 16:05:54
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wjh-86

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 鼓励新虫交流 2011-04-11 13:52:42
王有朝(金币+1): 但是我的OD值也太低了……汗…… 2011-04-12 15:25:05
我觉得测OD值检测DNA不准确，还是跑电泳检测
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5楼2011-04-10 16:15:50
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6): good 2011-04-11 13:52:52
王有朝(金币+1): 我不是用的EB，用的是GOLD VIEW。含量是很低，藻类全基因组能提到多少怎么才能查到啊？我也一直不知道这个问题。 2011-04-12 15:23:51
引用回帖:
Originally posted by 王有朝 at 2011-03-30 16:56:23:
藻类全基因组DNA粗提取后进行电泳，想看看到底有没有提到DNA。之前测得
A280 = 0.467
A260 = 0.949
A230 = 0.373
A260/ A280 = 2.03
A260/ A230 = 2.55
浓度：C = 47.4ng/µL
1%琼脂糖凝胶电泳， ...

EB染色的话，能看到条带的DNA量下限大约是10ng，而且往往达不到。
您的浓度如果是 47.4ng/ml的话，显然太低，超过了EB染色的分辨率。
藻类全基因组DNA粗提一般能提到多少量的DNA?
另外，电泳问题最好上图，方便大家分析哦。
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6楼2011-04-10 19:13:41
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-11 13:53:00
这样是不行的，楼主提取后的dna量是比较少的，要经过pcr扩增目的条带后电泳才可能看到清晰条带
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7楼2011-04-11 12:47:09
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smiled001

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
8楼2011-04-12 21:17:04
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314243568

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+5): 鼓励新朋友参与交流+3，鼓励上图+2。 2011-04-13 16:38:14
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-10 19:13:41:
EB染色的话，能看到条带的DNA量下限大约是10ng，而且往往达不到。
您的浓度如果是 47.4ng/ml的话，显然太低，超过了EB染色的分辨率。
藻类全基因组DNA粗提一般能提到多少量的DNA?
另外，电泳问题最好上图，方 ...

我对你的回答持怀疑态度，EB染色法，DNA量下线绝对不到10ng，而且远低于这个，我曾经在南方基因组做过测序工作，测序上样量最少要10ng/ul，因此我们回收后要做个定量电泳。我传个图片给你看看,定量的上样量都是1ul，定量maker为10ng/ul.

LZ的DNA量没有问题，像这种检测存在DNA，但电泳没有条带的,maker都能跑出来的情况，据我了解很大一部分都是个人操作问题（包括操作，试剂配制，缓冲液浓度，loading buffer问题等），往往换个人，就可以跑出来了。。。
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9楼2011-04-13 14:06:19
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
LZ的dna的A260/ A280 = 2.03，可能还有rna，不太准。下一步的目的是什么？pcr？只要有一点，就是可以用于pcr的。
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10楼2011-04-14 18:43:06
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