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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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王有朝

新虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】DNA提取问题

藻类全基因组DNA粗提取后进行电泳,想看看到底有没有提到DNA。之前测得
A280 = 0.467
A260 = 0.949
A230 = 0.373
A260/ A280 = 2.03
A260/ A230 = 2.55
浓度:C = 47.4ng/µL
1%琼脂糖凝胶电泳,结果电泳Marker跑出来了,但是未看到我所提的DNA条带,那是什么原因?
求解!!!
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314243568

银虫 (小有名气)


★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流! 2011-04-10 19:09:03
配胶可能用去离子水配了,没有用TAE,一般的maker在去离子水里配的胶里是可以跑出来的,但是目的条带就跑不出来,或是效果很差!全从胶上面跑入缓冲液中了。或是DNA酶污染了。
2楼2011-04-10 11:56:46
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)


没有看到操作过程这个很难说哦~~
3楼2011-04-10 12:37:29
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smiled001

禁虫 (小有名气)

王有朝(金币+2): 哦,谢谢你。乙醇挥发不干净会导致样品从上样孔跑出来吗? 2011-04-12 15:22:28
本帖内容被屏蔽

4楼2011-04-10 16:05:54
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wjh-86

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 鼓励新虫交流 2011-04-11 13:52:42
王有朝(金币+1): 但是我的OD值也太低了……汗…… 2011-04-12 15:25:05
我觉得测OD值检测DNA不准确,还是跑电泳检测
5楼2011-04-10 16:15:50
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★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6): good 2011-04-11 13:52:52
王有朝(金币+1): 我不是用的EB,用的是GOLD VIEW。含量是很低,藻类全基因组能提到多少怎么才能查到啊?我也一直不知道这个问题。 2011-04-12 15:23:51
引用回帖:
Originally posted by 王有朝 at 2011-03-30 16:56:23:
藻类全基因组DNA粗提取后进行电泳,想看看到底有没有提到DNA。之前测得
A280 = 0.467
A260 = 0.949
A230 = 0.373
A260/ A280 = 2.03
A260/ A230 = 2.55
浓度:C = 47.4ng/µL
1%琼脂糖凝胶电泳, ...

EB染色的话,能看到条带的DNA量下限大约是10ng,而且往往达不到。
您的浓度如果是 47.4ng/ml的话,显然太低,超过了EB染色的分辨率。
藻类全基因组DNA粗提一般能提到多少量的DNA?
另外,电泳问题最好上图,方便大家分析哦。
6楼2011-04-10 19:13:41
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-11 13:53:00
这样是不行的,楼主提取后的dna量是比较少的,要经过pcr扩增目的条带后电泳才可能看到清晰条带
7楼2011-04-11 12:47:09
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smiled001

禁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽

8楼2011-04-12 21:17:04
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314243568

银虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
西瓜(金币+5): 鼓励新朋友参与交流+3,鼓励上图+2。 2011-04-13 16:38:14
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-10 19:13:41:
EB染色的话,能看到条带的DNA量下限大约是10ng,而且往往达不到。
您的浓度如果是 47.4ng/ml的话,显然太低,超过了EB染色的分辨率。
藻类全基因组DNA粗提一般能提到多少量的DNA?
另外,电泳问题最好上图,方 ...

我对你的回答持怀疑态度,EB染色法,DNA量下线绝对不到10ng,而且远低于这个,我曾经在南方基因组做过测序工作,测序上样量最少要10ng/ul,因此我们回收后要做个定量电泳。我传个图片给你看看,定量的上样量都是1ul,定量maker为10ng/ul.

LZ的DNA量没有问题,像这种检测存在DNA,但电泳没有条带的,maker都能跑出来的情况,据我了解很大一部分都是个人操作问题(包括操作,试剂配制,缓冲液浓度,loading buffer问题等),往往换个人,就可以跑出来了。。。



9楼2011-04-13 14:06:19
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
LZ的dna的A260/ A280 = 2.03,可能还有rna,不太准。下一步的目的是什么?pcr?只要有一点,就是可以用于pcr的。
10楼2011-04-14 18:43:06
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