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王有朝

新虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】DNA提取问题

藻类全基因组DNA粗提取后进行电泳,想看看到底有没有提到DNA。之前测得
A280 = 0.467
A260 = 0.949
A230 = 0.373
A260/ A280 = 2.03
A260/ A230 = 2.55
浓度:C = 47.4ng/µL
1%琼脂糖凝胶电泳,结果电泳Marker跑出来了,但是未看到我所提的DNA条带,那是什么原因?
求解!!!
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314243568

银虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
西瓜(金币+5): 鼓励新朋友参与交流+3,鼓励上图+2。 2011-04-13 16:38:14
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-10 19:13:41:
EB染色的话,能看到条带的DNA量下限大约是10ng,而且往往达不到。
您的浓度如果是 47.4ng/ml的话,显然太低,超过了EB染色的分辨率。
藻类全基因组DNA粗提一般能提到多少量的DNA?
另外,电泳问题最好上图,方 ...

我对你的回答持怀疑态度,EB染色法,DNA量下线绝对不到10ng,而且远低于这个,我曾经在南方基因组做过测序工作,测序上样量最少要10ng/ul,因此我们回收后要做个定量电泳。我传个图片给你看看,定量的上样量都是1ul,定量maker为10ng/ul.

LZ的DNA量没有问题,像这种检测存在DNA,但电泳没有条带的,maker都能跑出来的情况,据我了解很大一部分都是个人操作问题(包括操作,试剂配制,缓冲液浓度,loading buffer问题等),往往换个人,就可以跑出来了。。。



Nothingcannotbedone!
9楼2011-04-13 14:06:19
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314243568

银虫 (小有名气)


★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流! 2011-04-10 19:09:03
配胶可能用去离子水配了,没有用TAE,一般的maker在去离子水里配的胶里是可以跑出来的,但是目的条带就跑不出来,或是效果很差!全从胶上面跑入缓冲液中了。或是DNA酶污染了。
Nothingcannotbedone!
2楼2011-04-10 11:56:46
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)


没有看到操作过程这个很难说哦~~
3楼2011-04-10 12:37:29
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smiled001

禁虫 (小有名气)

王有朝(金币+2): 哦,谢谢你。乙醇挥发不干净会导致样品从上样孔跑出来吗? 2011-04-12 15:22:28
本帖内容被屏蔽

4楼2011-04-10 16:05:54
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