| 查看: 3059 | 回复: 14 | ||||
[求助]
从琼脂糖凝胶中回收DNA
|
||||
| PCR扩增以后进行2%琼脂糖凝胶，切下340bp左右的目的片段后，如何回收DNA，希望有经验的虫子给点具体的建议 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 生物资料 | 专业 |
» 猜你喜欢
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有184人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 琼脂糖凝胶电泳
已经有20人回复
- DNA琼脂糖凝胶电泳所需DNA的最低浓度
已经有6人回复
- 【求助/交流】DNA提取问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】琼脂糖凝胶DNA电泳失败
已经有7人回复
- 【求助/交流】凝胶电泳
已经有12人回复
- 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收，为什么回收率太低！
已经有53人回复
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
几种PCR 产物回收的详方法和步骤 1) 普通胶回收 如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。 2) 从低熔点凝胶回收DNA 纯化DNA片段 加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5分钟保温，使凝胶完全溶解。待放至室温，加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3分钟离心。反复1-2次。取上层液，加0.1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积无水乙醇，进行乙醇沉淀。将纯化的DNA加适量TE溶解，测定含量，备用（可用于目的基因结构分析，探针制备等）。 3) 扩增特异性好的PCR回收 如果PCR扩增特异性好，只是简单的PCR产物纯化回收，可以在PCR产物中加入50ug／ml 的蛋白酶K，37度1h，酚／氯仿抽提一次，氯仿抽提一次，上清加入0.1体积的醋酸钠，2.5体积的无水乙醇沉淀回收。 |
14楼2012-08-18 19:37:47
2楼2012-08-17 16:40:37
dshlove
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 17
- 应助: 237 (大学生)
- 金币: 4764.7
- 散金: 20
- 红花: 10
- 帖子: 852
- 在线: 419.2小时
- 虫号: 1609389
- 注册: 2012-02-10
- 性别: GG
- 专业: 污染控制化学
3楼2012-08-17 16:41:54
woshizhufeng
新虫 (小有名气)
- 应助: 34 (小学生)
- 金币: 8.4
- 红花: 1
- 帖子: 298
- 在线: 115.3小时
- 虫号: 1310932
- 注册: 2011-05-30
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
4楼2012-08-17 17:33:23
烟涛微茫
铁杆木虫 (文坛精英)
卡牌大师
- 应助: 56 (初中生)
- 金币: 7695.5
- 散金: 2662
- 红花: 95
- 沙发: 465
- 帖子: 17285
- 在线: 1303.2小时
- 虫号: 1935281
- 注册: 2012-08-12
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
用回收试剂盒就可以回收DNA 
5楼2012-08-17 19:59:43
6楼2012-08-17 20:07:18
yesucao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 3877.1
- 散金: 45
- 红花: 6
- 帖子: 374
- 在线: 203.4小时
- 虫号: 810829
- 注册: 2009-07-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2012-08-17 21:59:34
hutingting
银虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 62.5
- 散金: 92
- 红花: 1
- 帖子: 372
- 在线: 61.1小时
- 虫号: 739432
- 注册: 2009-04-03
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
8楼2012-08-18 09:09:25
9楼2012-08-18 09:31:44
zy晨曦
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2258.4
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 205
- 在线: 77.5小时
- 虫号: 1755080
- 注册: 2012-04-14
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
10楼2012-08-18 10:22:05
