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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做连接时，如何测定DNA的浓度，电泳图怎么看浓度
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caigen2012

新虫 (小有名气)

[求助] 做连接时，如何测定DNA的浓度，电泳图怎么看浓度

做目的基因和载体的连接，不知道怎么测DNA浓度，有说测OD260，但是样品太少，取了1ul稀释500倍测得为负值，肯定不对的，不知道分光度计比色皿最少能测多大体积的样品，是不是500ul太小了，想做大一点体积，DNA样品又太少。于是载体和目的基因各取了5ul电泳（如图：从左到右依次为酶切后的载体片段、目的片段1、目的片段2、marker）marker也是取的5ul，最亮的为150ng/ul，其他为50ng/ul，根据这个电泳图可以看出我的DNA浓度么？如果用测OD260的方法，我应该怎么做？样品只有20ul左右了吧，就是觉得体积太小分光光度计测不出来，稀释太多又不容易测出来。求各位大神帮帮忙啊
做连接时，如何测定DNA的浓度，电泳图怎么看浓度
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不晓得好好做实验能不能娶到漂亮媳妇呀？
1楼 2013-07-01 22:17:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-02 02:43:35
caigen2012: 金币+3, ★★★很有帮助, 基本看不见那个条带是质粒，浓度估计多少啊？ 2013-07-02 09:51:04
一般用nanodrop测，1μl就可以了。如果没有，跑胶可以估测。可以比较条带与marker中分子量比较接近的条带的灰度，再根据marker的量计算出大致的浓度。做连接用不了多少DNA的。根据你说的情况，我觉得你的样品浓度分别大概在30和15左右。
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2楼2013-07-02 00:33:00
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般都是用nanodrop测定DNA和RNA的浓度，用量只需要1ul
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-07-02 02:44:47
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aloon111

金虫 (正式写手)
没有严格要求的话一般不用测浓度，2号样取1ul做连接就可以了。
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汇天下之贤
4楼2013-07-02 08:05:53
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caigen2012

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by aloon111 at 2013-07-02 08:05:53
没有严格要求的话一般不用测浓度，2号样取1ul做连接就可以了。

我的质粒很淡（左1），基本看不见，怎么加啊
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不晓得好好做实验能不能娶到漂亮媳妇呀？
5楼2013-07-02 09:21:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-02 00:33:00
一般用nanodrop测，1μl就可以了。如果没有，跑胶可以估测。可以比较条带与marker中分子量比较接近的条带的灰度，再根据marker的量计算出大致的浓度。做连接用不了多少DNA的。根据你说的情况，我觉得你的样品浓度分 ...

载体的浓度太低，条带比marker暗很多，不是很好估计，大概是3-5？
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6楼2013-07-02 12:22:28
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jiuer99

禁虫 (初入文坛)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-03 15:27:12
本帖内容被屏蔽
7楼2013-07-03 15:05:52
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dang_qi

银虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-04 00:46:53
引用回帖:
5楼: Originally posted by caigen2012 at 2013-07-02 09:21:43
我的质粒很淡（左1），基本看不见，怎么加啊...

质粒浓度低就全加吧，目的基因相应的也多加一点。我之前做过一次，浓度比这还低，条带猛一看就看不出来，纯粹是练手的心态继续往下做，最后竟然转化成功了。就算做不出来重头再来嘛
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手指所触碰到的距离必有你所期待的风景.
8楼2013-10-03 14:56:56
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