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caigen2012

新虫 (小有名气)

[求助] 做连接时,如何测定DNA的浓度,电泳图怎么看浓度

做目的基因和载体的连接,不知道怎么测DNA浓度,有说测OD260,但是样品太少,取了1ul稀释500倍测得为负值,肯定不对的,不知道分光度计比色皿最少能测多大体积的样品,是不是500ul太小了,想做大一点体积,DNA样品又太少。于是载体和目的基因各取了5ul电泳(如图:从左到右依次为酶切后的载体片段、目的片段1、目的片段2、marker)marker也是取的5ul,最亮的为150ng/ul,其他为50ng/ul,根据这个电泳图可以看出我的DNA浓度么?如果用测OD260的方法,我应该怎么做?样品只有20ul左右了吧,就是觉得体积太小分光光度计测不出来,稀释太多又不容易测出来。求各位大神帮帮忙啊
做连接时,如何测定DNA的浓度,电泳图怎么看浓度
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不晓得好好做实验能不能娶到漂亮媳妇呀?
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助! 2013-07-02 02:43:35
caigen2012: 金币+3, ★★★很有帮助, 基本看不见那个条带是质粒,浓度估计多少啊? 2013-07-02 09:51:04
一般用nanodrop测,1μl就可以了。如果没有,跑胶可以估测。可以比较条带与marker中分子量比较接近的条带的灰度,再根据marker的量计算出大致的浓度。做连接用不了多少DNA的。根据你说的情况,我觉得你的样品浓度分别大概在30和15左右。
2楼2013-07-02 00:33:00
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般都是用nanodrop测定DNA和RNA的浓度,用量只需要1ul
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-07-02 02:44:47
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aloon111

金虫 (正式写手)

没有严格要求的话一般不用测浓度,2号样取1ul做连接就可以了。
汇天下之贤
4楼2013-07-02 08:05:53
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caigen2012

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by aloon111 at 2013-07-02 08:05:53
没有严格要求的话一般不用测浓度,2号样取1ul做连接就可以了。

我的质粒很淡(左1),基本看不见,怎么加啊
不晓得好好做实验能不能娶到漂亮媳妇呀?
5楼2013-07-02 09:21:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-02 00:33:00
一般用nanodrop测,1μl就可以了。如果没有,跑胶可以估测。可以比较条带与marker中分子量比较接近的条带的灰度,再根据marker的量计算出大致的浓度。做连接用不了多少DNA的。根据你说的情况,我觉得你的样品浓度分 ...

载体的浓度太低,条带比marker暗很多,不是很好估计,大概是3-5?
6楼2013-07-02 12:22:28
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jiuer99

禁虫 (初入文坛)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-03 15:27:12
本帖内容被屏蔽

7楼2013-07-03 15:05:52
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dang_qi

银虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-04 00:46:53
引用回帖:
5楼: Originally posted by caigen2012 at 2013-07-02 09:21:43
我的质粒很淡(左1),基本看不见,怎么加啊...

质粒浓度低就全加吧,目的基因相应的也多加一点。我之前做过一次,浓度比这还低,条带猛一看就看不出来,纯粹是练手的心态继续往下做,最后竟然转化成功了。就算做不出来重头再来嘛
手指所触碰到的距离必有你所期待的风景.
8楼2013-10-03 14:56:56
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