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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 园艺 » 提取DNA，浓度一直很低，请叫原因
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淡墨melon

铜虫 (小有名气)

[求助] 提取DNA，浓度一直很低，请叫原因

我用的普通的CTAB提取法。材料是指甲盖大小叶片，步骤大致是600CTAB磨，抽400上清，再来200上清，用200异丙醇沉淀2个小时，60TE溶解，加酶去RNA。
前12个是我的甜瓜叶片材料，后四个是帮同门带的猕猴桃花和叶片。
图片二、琼脂糖检测结果
图片一、电脑检测，有浓度显示，其中三个和第四个是重复，怎么相差也那么大
我的问题是：1、为什么dna的浓度是那么低，琼脂糖检测结果也蛮好的，求原因。
                     2、为什么260/230那么低。

DNA电脑检测（第三个和第四个是重复）.jpg



琼脂糖检测.jpg
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活得精彩，不要有遗憾！！
1楼2013-04-19 21:23:03
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user59888

金虫 (文坛精英)

宫创始人 ------小妮

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ＤＮＡ提取中应注意的几个问题

1) 最好使用幼嫩的叶片，如果材料量大(20ｇ以上)或所用的植物材料较老，或材料含有较多的酚类物质，应提高β-巯基乙醇的量。

2) 转移ＤＮＡ溶液用的枪头要孔大、光滑，避免对ＤＮＡ的机械损伤。

3) 操作过程中应避免DNAase污染，提取ＤＮＡ的溶液及用品以及植物材料都要清洁，溶液及用品要高温高压灭菌(或抽滤灭菌)。

4) 提取出来的DNA可以在4℃贮存几周期或几个月，一般不提倡冻起来，因低温冷冻会导致DNA的断裂。若长时间保存，最好以乙醇沉淀的形式将DNA保存在-20℃。

5）植物材料应一次使用，避免重复冻融。
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此人已死，没烧纸的半夜出来喝酒
2楼2013-04-19 22:40:51
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wuxingbo1986

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个DNA提取的浓度是肯定可以的，琼脂糖最能说明问题，可能是提取的DNA里边有其他的杂质，影响了光的吸收或者测定仪有些问题，才导致测定浓度低吧，看你是做什么用的，如果是分子标记，这个浓度足够了，还需要稀释。如果想知道确切的浓度，你纯化一下试试看
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3楼2013-04-20 11:15:34
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淡墨melon

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wuxingbo1986 at 2013-04-20 11:15:34
你这个DNA提取的浓度是肯定可以的，琼脂糖最能说明问题，可能是提取的DNA里边有其他的杂质，影响了光的吸收或者测定仪有些问题，才导致测定浓度低吧，看你是做什么用的，如果是分子标记，这个浓度足够了，还需要稀释 ...

现在我是不敢纯化了，担心本来浓度就低，一纯化就没了。。。。
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活得精彩，不要有遗憾！！
4楼2013-04-20 22:10:16
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nokia10086

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

希望你找到问题，解决问题，发大文章
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5楼2013-05-21 22:16:33
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yuantii

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

推断可能的原因之一：
电脑检测的时候样品的上样量过少，分光光度的通道可能没有完全覆盖上DNA样品，这样得到的结果就会很不一致
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6楼2013-06-16 23:14:05
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