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淡墨melon

铜虫 (小有名气)

[求助] 提取DNA,浓度一直很低,请叫原因

我用的普通的CTAB提取法。材料是指甲盖大小叶片,步骤大致是600CTAB磨,抽400上清,再来200上清,用200异丙醇沉淀2个小时,60TE溶解,加酶去RNA。
前12个是我的甜瓜叶片材料,后四个是帮同门带的猕猴桃花和叶片。
图片二、琼脂糖检测结果
图片一、电脑检测,有浓度显示,其中三个和第四个是重复,怎么相差也那么大
我的问题是:1、为什么dna的浓度是那么低,琼脂糖检测结果也蛮好的,求原因。
                     2、为什么260/230那么低。

DNA电脑检测(第三个和第四个是重复).jpg



琼脂糖检测.jpg
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活得精彩,不要有遗憾!!
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淡墨melon

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wuxingbo1986 at 2013-04-20 11:15:34
你这个DNA提取的浓度是肯定可以的,琼脂糖最能说明问题,可能是提取的DNA里边有其他的杂质,影响了光的吸收或者测定仪有些问题,才导致测定浓度低吧,看你是做什么用的,如果是分子标记,这个浓度足够了,还需要稀释 ...

现在我是不敢纯化了,担心本来浓度就低,一纯化就没了。。。。
活得精彩,不要有遗憾!!
4楼2013-04-20 22:10:16
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user59888

金虫 (文坛精英)

宫创始人 ------小妮

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DNA提取中应注意的几个问题

1) 最好使用幼嫩的叶片,如果材料量大(20g以上)或所用的植物材料较老,或材料含有较多的酚类物质,应提高β-巯基乙醇的量。

2) 转移DNA溶液用的枪头要孔大、光滑,避免对DNA的机械损伤。

3) 操作过程中应避免DNAase污染,提取DNA的溶液及用品以及植物材料都要清洁,溶液及用品要高温高压灭菌(或抽滤灭菌)。

4) 提取出来的DNA可以在4℃贮存几周期或几个月,一般不提倡冻起来,因低温冷冻会导致DNA的断裂。若长时间保存,最好以乙醇沉淀的形式将DNA保存在-20℃。

5)植物材料应一次使用,避免重复冻融。
此人已死,没烧纸的半夜出来喝酒
2楼2013-04-19 22:40:51
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wuxingbo1986

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个DNA提取的浓度是肯定可以的,琼脂糖最能说明问题,可能是提取的DNA里边有其他的杂质,影响了光的吸收或者测定仪有些问题,才导致测定浓度低吧,看你是做什么用的,如果是分子标记,这个浓度足够了,还需要稀释。如果想知道确切的浓度,你纯化一下试试看
3楼2013-04-20 11:15:34
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nokia10086

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

希望你找到问题,解决问题,发大文章
5楼2013-05-21 22:16:33
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