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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位大侠赐教，，酚氯仿提取的DNA,纯度很低，能不能进一步纯化下啊，如何除去酚杂质呢
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携手前

新虫 (初入文坛)

[求助] 各位大侠赐教，，酚氯仿提取的DNA,纯度很低，能不能进一步纯化下啊，如何除去酚杂质呢

提取的DNA纯度很低，260/280的值大概在0.9-1.0之间，吸收峰在270nm处（见上图），怕直接作为荧光定量RCR的模板影响实验结果，所以又加了一步氯仿抽提，乙醇沉淀，接着又测定DNA的含量和纯度，结果太诡异了，竟然没有吸收峰了，但是纯度提高了，DNA含量降低了，（见下图）

上图



下图
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1楼2012-08-21 11:42:40
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携手前

新虫 (初入文坛)
自定一下，免得沉了。各位踊跃回答哦，小女子不胜感激
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2楼2012-08-21 11:43:34
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wittyjc

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
弃乙醇上清的时候不小心倒掉了一些？
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3楼2012-08-21 14:36:56
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携手前

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wittyjc at 2012-08-21 14:36:56
弃乙醇上清的时候不小心倒掉了一些？

这个也有可能，但是怎么会没有一点峰呢？我怀疑DNA没有全部溶解，现在继续溶解试一下。。。。希望能有好结果
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4楼2012-08-21 14:40:34
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王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
貌似DNA的OD260/280在1.6至1.8是比较纯的，比值太低了蛋白含量较多，不合适往下做RT-PCR，祝实验顺利。。。。。。
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5楼2012-08-21 16:48:27
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王礼鹏

金虫 (小有名气)
哦，不好意思，写错了，是OD值为1.7至1.9之间，最好是1.8左右
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6楼2012-08-21 16:52:52
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的什么测的？是微量核酸定量仪吗？
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7楼2012-08-23 08:44:27
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