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ml4528000

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA的酚氯仿抽提后乙醇沉淀不出来

小弟今天对前段时间得到的cDNA进行酚氯仿抽提除去杂质进行下一步实验,具体步骤是先加等体积酚:氯仿:异戊醇混合物收集水相,然后加等体积氯仿:异戊醇再收集水相,接着加2倍体积的正丁醇脱水,取水相加入2倍体积的无水乙醇和总体积1/10的4M醋酸铵,这步骤没有看到DNA沉淀下来。前面的抽提和脱水以前做过,能确定DNA在水相中,不知道沉淀的步骤有什么问题,或者要注意什么,还请大伙不吝赐教啊!!!
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biowangkun

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5, EPI+1): 鼓励新虫参与 2011-06-20 08:16:32
可以加大正丁醇的比例再试试。如果可以的话,加上糖原进行定位
2楼2011-06-18 12:33:35
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得会不会是降解了,你看一下是不是时间长了
3楼2011-06-18 15:04:28
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

silicare: ? 2011-06-20 08:17:02
只有纯蒸汽在0.1MPa时才是121°,你看一下灭菌过程你是否排气了,尽量让生成的蒸汽将锅里的空气置换出来。如果没有问题,你要看一下表是不是坏了
4楼2011-06-18 15:12:09
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

silicare: 异戊醇?? 2011-06-20 08:17:29
乙醇浓度太低,DNA要在70%以上的DNA中才能沉淀。建议楼主可以用异戊醇沉淀后,把沉淀放到70%乙醇和醋酸钠中。
5楼2011-06-19 22:16:21
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-06-18 15:12:09:
只有纯蒸汽在0.1MPa时才是121°,你看一下灭菌过程你是否排气了,尽量让生成的蒸汽将锅里的空气置换出来。如果没有问题,你要看一下表是不是坏了

??????????
6楼2011-06-19 22:29:12
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healerly

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

7楼2011-06-20 07:49:28
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

异丙醇。。。打错了~!
8楼2011-06-20 11:20:21
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lhwen182

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我想问一下为什么要加正丁醇啊,我们一般直接两部氯仿异戊醇抽提后取上清加2倍无水乙醇沉淀。你的乙醇是预冷的么?沉淀时间够么?
9楼2011-06-21 11:04:59
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携手前

新虫 (初入文坛)

当DNA的量很少的时候,确实看不到DNA沉淀的,但是不要管他,你继续乙醇沉淀,然后溶解后,测定DNA含量
10楼2012-08-21 15:12:17
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