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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA的酚氯仿抽提后乙醇沉淀不出来
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ml4528000

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA的酚氯仿抽提后乙醇沉淀不出来

小弟今天对前段时间得到的cDNA进行酚氯仿抽提除去杂质进行下一步实验，具体步骤是先加等体积酚：氯仿：异戊醇混合物收集水相，然后加等体积氯仿:异戊醇再收集水相，接着加2倍体积的正丁醇脱水，取水相加入2倍体积的无水乙醇和总体积1/10的4M醋酸铵，这步骤没有看到DNA沉淀下来。前面的抽提和脱水以前做过，能确定DNA在水相中，不知道沉淀的步骤有什么问题，或者要注意什么，还请大伙不吝赐教啊！！！
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1楼 2011-06-16 11:14:44
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biowangkun

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5, EPI+1): 鼓励新虫参与 2011-06-20 08:16:32
可以加大正丁醇的比例再试试。如果可以的话，加上糖原进行定位
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2楼2011-06-18 12:33:35
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得会不会是降解了，你看一下是不是时间长了
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3楼2011-06-18 15:04:28
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

silicare: ？ 2011-06-20 08:17:02
只有纯蒸汽在0.1MPa时才是121°，你看一下灭菌过程你是否排气了，尽量让生成的蒸汽将锅里的空气置换出来。如果没有问题，你要看一下表是不是坏了
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4楼2011-06-18 15:12:09
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

silicare: 异戊醇？？ 2011-06-20 08:17:29
乙醇浓度太低，DNA要在70%以上的DNA中才能沉淀。建议楼主可以用异戊醇沉淀后，把沉淀放到70%乙醇和醋酸钠中。
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5楼2011-06-19 22:16:21
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-06-18 15:12:09:
只有纯蒸汽在0.1MPa时才是121°，你看一下灭菌过程你是否排气了，尽量让生成的蒸汽将锅里的空气置换出来。如果没有问题，你要看一下表是不是坏了

??????????
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6楼2011-06-19 22:29:12
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healerly

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2011-06-20 07:49:28
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

异丙醇。。。打错了~！
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8楼2011-06-20 11:20:21
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lhwen182

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我想问一下为什么要加正丁醇啊，我们一般直接两部氯仿异戊醇抽提后取上清加2倍无水乙醇沉淀。你的乙醇是预冷的么？沉淀时间够么？
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9楼2011-06-21 11:04:59
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携手前

新虫 (初入文坛)
当DNA的量很少的时候，确实看不到DNA沉淀的，但是不要管他，你继续乙醇沉淀，然后溶解后，测定DNA含量
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10楼2012-08-21 15:12:17
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