应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于提DNA后，测的OD值问题，有杂志
81/1返回列表
查看: 1632  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

752083371

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于提DNA后，测的OD值问题，有杂志

提了几次怎么结果都是A260/A230的值都小于1，怎么纯化啊？纯化的步骤。
还有就是dna浓度一直很低。
还有就是去除RNA时候加rna酶是什么时候加，加上酶之后还要纯化DNA吗？

就这点金币了，都给你了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-07 09:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是大肠杆菌里面提DNA，关键是看 260/280 的比例是否 1.75-1.85之间，如果这个比例是对的，那么就没有蛋白的杂质。高于这个比列，有RNA杂质，低于这个比例，有蛋白杂质。
260/230的比例，如果你通过柱子提取的话，里面有些化学物质是有紫外吸收的，并不能说明什么问题
跑了电泳吗？电泳才是金标准，其他的测量，都是参考。
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
2楼2012-12-07 11:31:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

752083371

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2012-12-07 11:31:39
如果是大肠杆菌里面提DNA，关键是看 260/280 的比例是否 1.75-1.85之间，如果这个比例是对的，那么就没有蛋白的杂质。高于这个比列，有RNA杂质，低于这个比例，有蛋白杂质。
260/230的比例，如果你通过柱子提取的话 ...

但是我这最终要进行高通量测序的，所以对这个比值要求高一点，我用的是普通的酚氯仿-异戊醇法提的dna，嗯，跑了，带很好，但是浓度为什么还不到100ng/ul！
还有就是去rna的步骤是什么啊？
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-07 12:45:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是酚氯仿法提的DNA，如果230/260低可能是有少量酚氯仿的污染，提取的时候每步尽量不要触及有机相，宁可少吸一点。加RNase可以在最开始裂解的时候就加。如果没有除干净，可以在最后提好后再处理一下。此时酶混合在DNA里面，一般不影响下游实验，可以不除。如果实在需要除去，可以再用酚抽一下。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-12-07 12:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

752083371

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-07 12:54:24
如果是酚氯仿法提的DNA，如果230/260低可能是有少量酚氯仿的污染，提取的时候每步尽量不要触及有机相，宁可少吸一点。加RNase可以在最开始裂解的时候就加。如果没有除干净，可以在最后提好后再处理一下。此时酶混合 ...

你知道加SNAse的量是怎么确定吗？
赞一下 回复此楼
5楼2012-12-07 13:05:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

752083371

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-07 12:54:24
如果是酚氯仿法提的DNA，如果230/260低可能是有少量酚氯仿的污染，提取的时候每步尽量不要触及有机相，宁可少吸一点。加RNase可以在最开始裂解的时候就加。如果没有除干净，可以在最后提好后再处理一下。此时酶混合 ...

裂解的时候 不是加蛋白酶k吗？这样子不会把RNASE酶给消化掉吗
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-07 13:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 752083371 at 2012-12-07 13:38:35
裂解的时候 不是加蛋白酶k吗？这样子不会把RNASE酶给消化掉吗...

如果裂解时加了蛋白酶K，可以酚氯仿抽提过后再用RNase处理。
赞一下 回复此楼
7楼2012-12-08 09:30:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三撇五撇

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般我会PCR克隆一下
赞一下 回复此楼
8楼2012-12-09 11:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 752083371 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +16 稻妻小编 2026-03-09 18/900 2026-03-14 02:00 by JourneyLucky
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭