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752083371

新虫 (初入文坛)

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[求助] 关于提DNA后，测的OD值问题，有杂志

提了几次怎么结果都是A260/A230的值都小于1，怎么纯化啊？纯化的步骤。
还有就是dna浓度一直很低。
还有就是去除RNA时候加rna酶是什么时候加，加上酶之后还要纯化DNA吗？

就这点金币了，都给你了

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1楼 2012-12-07 09:58:02

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pennchem

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

如果是大肠杆菌里面提DNA，关键是看 260/280 的比例是否 1.75-1.85之间，如果这个比例是对的，那么就没有蛋白的杂质。高于这个比列，有RNA杂质，低于这个比例，有蛋白杂质。
260/230的比例，如果你通过柱子提取的话，里面有些化学物质是有紫外吸收的，并不能说明什么问题
跑了电泳吗？电泳才是金标准，其他的测量，都是参考。

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行至水穷处，坐看云起时

2楼2012-12-07 11:31:39

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752083371

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by pennchem at 2012-12-07 11:31:39
如果是大肠杆菌里面提DNA，关键是看 260/280 的比例是否 1.75-1.85之间，如果这个比例是对的，那么就没有蛋白的杂质。高于这个比列，有RNA杂质，低于这个比例，有蛋白杂质。
260/230的比例，如果你通过柱子提取的话 ...

但是我这最终要进行高通量测序的，所以对这个比值要求高一点，我用的是普通的酚氯仿-异戊醇法提的dna，嗯，跑了，带很好，但是浓度为什么还不到100ng/ul！
还有就是去rna的步骤是什么啊？

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3楼2012-12-07 12:45:30

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

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如果是酚氯仿法提的DNA，如果230/260低可能是有少量酚氯仿的污染，提取的时候每步尽量不要触及有机相，宁可少吸一点。加RNase可以在最开始裂解的时候就加。如果没有除干净，可以在最后提好后再处理一下。此时酶混合在DNA里面，一般不影响下游实验，可以不除。如果实在需要除去，可以再用酚抽一下。

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4楼2012-12-07 12:54:24

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引用回帖:

4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-07 12:54:24
如果是酚氯仿法提的DNA，如果230/260低可能是有少量酚氯仿的污染，提取的时候每步尽量不要触及有机相，宁可少吸一点。加RNase可以在最开始裂解的时候就加。如果没有除干净，可以在最后提好后再处理一下。此时酶混合 ...

你知道加SNAse的量是怎么确定吗？