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752083371

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于提DNA后，测的OD值问题，有杂志

提了几次怎么结果都是A260/A230的值都小于1，怎么纯化啊？纯化的步骤。
还有就是dna浓度一直很低。
还有就是去除RNA时候加rna酶是什么时候加，加上酶之后还要纯化DNA吗？

就这点金币了，都给你了
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1楼 2012-12-07 09:58:02
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是大肠杆菌里面提DNA，关键是看 260/280 的比例是否 1.75-1.85之间，如果这个比例是对的，那么就没有蛋白的杂质。高于这个比列，有RNA杂质，低于这个比例，有蛋白杂质。
260/230的比例，如果你通过柱子提取的话，里面有些化学物质是有紫外吸收的，并不能说明什么问题
跑了电泳吗？电泳才是金标准，其他的测量，都是参考。
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2012-12-07 11:31:39
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752083371

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2012-12-07 11:31:39
如果是大肠杆菌里面提DNA，关键是看 260/280 的比例是否 1.75-1.85之间，如果这个比例是对的，那么就没有蛋白的杂质。高于这个比列，有RNA杂质，低于这个比例，有蛋白杂质。
260/230的比例，如果你通过柱子提取的话 ...

但是我这最终要进行高通量测序的，所以对这个比值要求高一点，我用的是普通的酚氯仿-异戊醇法提的dna，嗯，跑了，带很好，但是浓度为什么还不到100ng/ul！
还有就是去rna的步骤是什么啊？
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3楼2012-12-07 12:45:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是酚氯仿法提的DNA，如果230/260低可能是有少量酚氯仿的污染，提取的时候每步尽量不要触及有机相，宁可少吸一点。加RNase可以在最开始裂解的时候就加。如果没有除干净，可以在最后提好后再处理一下。此时酶混合在DNA里面，一般不影响下游实验，可以不除。如果实在需要除去，可以再用酚抽一下。
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4楼2012-12-07 12:54:24
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752083371

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-07 12:54:24
如果是酚氯仿法提的DNA，如果230/260低可能是有少量酚氯仿的污染，提取的时候每步尽量不要触及有机相，宁可少吸一点。加RNase可以在最开始裂解的时候就加。如果没有除干净，可以在最后提好后再处理一下。此时酶混合 ...

你知道加SNAse的量是怎么确定吗？
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5楼2012-12-07 13:05:26
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752083371

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-07 12:54:24
如果是酚氯仿法提的DNA，如果230/260低可能是有少量酚氯仿的污染，提取的时候每步尽量不要触及有机相，宁可少吸一点。加RNase可以在最开始裂解的时候就加。如果没有除干净，可以在最后提好后再处理一下。此时酶混合 ...

裂解的时候 不是加蛋白酶k吗？这样子不会把RNASE酶给消化掉吗
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6楼2012-12-07 13:38:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 752083371 at 2012-12-07 13:38:35
裂解的时候 不是加蛋白酶k吗？这样子不会把RNASE酶给消化掉吗...

如果裂解时加了蛋白酶K，可以酚氯仿抽提过后再用RNase处理。
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7楼2012-12-08 09:30:20
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三撇五撇

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般我会PCR克隆一下
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8楼2012-12-09 11:44:45
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