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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶电泳条带出现拖尾，条带为笑脸状，为何？
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dzjlm0207

铜虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳条带出现拖尾，条带为笑脸状，为何？

求助！！！！
最左端为marker， 右面分别是不同退火温度下的扩增产物，电泳条件是1%的琼脂糖凝胶，95v，30min。求高手指点，为什么会出现变宽弯曲的条带，条带前后的拖尾又分别是什么原因造成的呀？
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1楼 2013-11-21 13:18:24
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huahu3600

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-21 14:01:53
dzjlm0207: 金币+5, ★有帮助 2013-11-25 14:17:47
PCR模板不纯的话，容易出现拖尾。
至于，笑脸的问题，你试着电压降低一些，上样量小一些，应该就好了。
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2楼2013-11-21 13:36:34
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dzjlm0207

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-11-21 13:36:34
PCR模板不纯的话，容易出现拖尾。
至于，笑脸的问题，你试着电压降低一些，上样量小一些，应该就好了。

我的PCR模板不是自己提取的，是生物公司给合成的现成质粒，所以纯度应该还可以。我昨天跑了一个90v，结果marker条带都很模糊，我几天就调回95了
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3楼2013-11-21 13:50:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-21 14:02:04
dzjlm0207: 金币+5, ★有帮助 2013-11-25 14:18:18
把电泳缓冲液换换新。如果是质粒模板，做PCR时需要稀释，有可能是模板浓度过高。
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4楼2013-11-21 14:00:47
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huahu3600

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dzjlm0207 at 2013-11-21 13:50:34
我的PCR模板不是自己提取的，是生物公司给合成的现成质粒，所以纯度应该还可以。我昨天跑了一个90v，结果marker条带都很模糊，我几天就调回95了...

质粒作为模板，先定量，然后稀释，每个反应用量为10-100 ng足够了，多了无益。
marker都很糊，那就是胶，缓冲液的问题了。
但是，你这个图，marker还可以，不拖不糊，我觉得跟上样量有关系。
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5楼2013-11-21 14:08:36
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dzjlm0207

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-21 14:00:47
把电泳缓冲液换换新。如果是质粒模板，做PCR时需要稀释，有可能是模板浓度过高。

我昨晚新换的缓冲液，质粒模板我也稀释过了，使用浓度是20ng/ul，体系里加了2ul，20ml的体系一共40ng模板
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6楼2013-11-21 14:22:23
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dzjlm0207

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-11-21 14:08:36
质粒作为模板，先定量，然后稀释，每个反应用量为10-100 ng足够了，多了无益。
marker都很糊，那就是胶，缓冲液的问题了。
但是，你这个图，marker还可以，不拖不糊，我觉得跟上样量有关系。...

好，我晚点减少加样量试一下，谢谢哈
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7楼2013-11-21 14:23:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dzjlm0207: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-11-25 14:16:34
引用回帖:
6楼: Originally posted by dzjlm0207 at 2013-11-21 14:22:23
我昨晚新换的缓冲液，质粒模板我也稀释过了，使用浓度是20ng/ul，体系里加了2ul，20ml的体系一共40ng模板...

质粒的分子量小，PCR时用100pg就足够，稀释50-100倍再P。
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8楼2013-11-22 01:38:34
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dzjlm0207

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-22 01:38:34
质粒的分子量小，PCR时用100pg就足够，稀释50-100倍再P。...

哦，我试试，谢谢哈

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9楼2013-11-23 11:39:42
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疯狂毒理学

新虫 (初入文坛)
最近我也是遇到这种情况·~每次都是~·我用的百分之2的胶，之前是180V20分钟·现在150V30分钟~还是这样  ，有大神说这是我之前的引物就用问题·
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10楼2015-01-20 15:40:25
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