24小时热门版块排行榜    

查看: 11907  |  回复: 10

dzjlm0207

铜虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳条带出现拖尾,条带为笑脸状,为何?

求助!!!!
最左端为marker, 右面分别是不同退火温度下的扩增产物,电泳条件是1%的琼脂糖凝胶,95v,30min。求高手指点,为什么会出现变宽弯曲的条带,条带前后的拖尾又分别是什么原因造成的呀?
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : Administrator_2013-11-21_13_时_14_分.jpg
  • 2013-11-21 13:20:21, 3.26 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huahu3600

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-11-21 14:01:53
dzjlm0207: 金币+5, 有帮助 2013-11-25 14:17:47
PCR模板不纯的话,容易出现拖尾。
至于,笑脸的问题,你试着电压降低一些,上样量小一些,应该就好了。
2楼2013-11-21 13:36:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dzjlm0207

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-11-21 13:36:34
PCR模板不纯的话,容易出现拖尾。
至于,笑脸的问题,你试着电压降低一些,上样量小一些,应该就好了。

我的PCR模板不是自己提取的,是生物公司给合成的现成质粒,所以纯度应该还可以。我昨天跑了一个90v,结果marker条带都很模糊,我几天就调回95了
3楼2013-11-21 13:50:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-11-21 14:02:04
dzjlm0207: 金币+5, 有帮助 2013-11-25 14:18:18
把电泳缓冲液换换新。如果是质粒模板,做PCR时需要稀释,有可能是模板浓度过高。
4楼2013-11-21 14:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huahu3600

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dzjlm0207 at 2013-11-21 13:50:34
我的PCR模板不是自己提取的,是生物公司给合成的现成质粒,所以纯度应该还可以。我昨天跑了一个90v,结果marker条带都很模糊,我几天就调回95了...

质粒作为模板,先定量,然后稀释,每个反应用量为10-100 ng足够了,多了无益。
marker都很糊,那就是胶,缓冲液的问题了。
但是,你这个图,marker还可以,不拖不糊,我觉得跟上样量有关系。
5楼2013-11-21 14:08:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dzjlm0207

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-21 14:00:47
把电泳缓冲液换换新。如果是质粒模板,做PCR时需要稀释,有可能是模板浓度过高。

我昨晚新换的缓冲液,质粒模板我也稀释过了,使用浓度是20ng/ul,体系里加了2ul,20ml的体系一共40ng模板
6楼2013-11-21 14:22:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dzjlm0207

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-11-21 14:08:36
质粒作为模板,先定量,然后稀释,每个反应用量为10-100 ng足够了,多了无益。
marker都很糊,那就是胶,缓冲液的问题了。
但是,你这个图,marker还可以,不拖不糊,我觉得跟上样量有关系。...

好,我晚点减少加样量试一下,谢谢哈
7楼2013-11-21 14:23:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dzjlm0207: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-11-25 14:16:34
引用回帖:
6楼: Originally posted by dzjlm0207 at 2013-11-21 14:22:23
我昨晚新换的缓冲液,质粒模板我也稀释过了,使用浓度是20ng/ul,体系里加了2ul,20ml的体系一共40ng模板...

质粒的分子量小,PCR时用100pg就足够,稀释50-100倍再P。
8楼2013-11-22 01:38:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dzjlm0207

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-22 01:38:34
质粒的分子量小,PCR时用100pg就足够,稀释50-100倍再P。...

哦,我试试,谢谢哈

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2013-11-23 11:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯狂毒理学

新虫 (初入文坛)

最近我也是遇到这种情况·~每次都是~·我用的百分之2的胶,之前是180V20分钟·现在150V30分钟~还是这样  ,有大神说这是我之前的引物就用问题·
10楼2015-01-20 15:40:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dzjlm0207 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:29 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:40 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 7/350 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:39 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中,邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 两块石头 +6 阿美_Lml888 2026-09-03 8/400 2026-09-05 13:52 by 阿美_Lml888
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才!!! +4 SCSIOyxguo 2026-09-03 7/350 2026-09-05 10:39 by Honglianlian
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
请填处理意见