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cpn木虫 (正式写手)
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【求助/交流】难看的琼脂糖电泳谱图 已有8人参与
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最近跑的琼脂糖电泳谱图奇丑无比。  用的别人的1*TAE，0.7%Agarose，100V恒压跑半个小时（电流从110mA增大到最后140mA）。 染料是一个国产的牌子，Genefinder，预加在胶里的。 琼脂糖用的biowest。 图上两个条带都是marker，最右边是1kb的marker，往左是hind III lambda DNA marker（Takara的）。 条带都有不同程度拖尾变形，1kb marker的条带看上去还有些弥散。 怎样改善？非常感谢！ |
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shengwufenzi
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2楼2010-04-26 21:19:11
shengwufenzi
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wwllkkhh
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cpn(金币+2):其实我也怀疑是染料的问题，我们实验室不止我，没人跑出好看的条带。但其它实验室用EB跑出来的就很好。 2010-04-27 15:51
cpn(金币+5):确实是用的genefinder染料的问题，加在胶里跑似乎对胶的影响很大，改用预染后上样，效果就改善很多了，不过条带亮度就暗了不少，marker里最大的片段似乎有点轻微的弥散。 2010-05-01 21:14
cpn: 回帖置顶 2012-08-13 15:07:47
cpn(金币+5):确实是用的genefinder染料的问题，加在胶里跑似乎对胶的影响很大，改用预染后上样，效果就改善很多了，不过条带亮度就暗了不少，marker里最大的片段似乎有点轻微的弥散。 2010-05-01 21:14
cpn: 回帖置顶 2012-08-13 15:07:47
| 我估计很有可能是染料的问题，我以前也用过什么花青素之类的，跑出来很难看，怀疑了很多，最后用EB，一切正常了，所以说，还是EB好，其他的像sybergreen,也还好，就是很贵，其实也有毒。 |
6楼2010-04-27 08:56:17
7楼2010-04-27 16:30:03
poog502
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cpn(金币+1):biorad的电泳仪，电流我只是设了个上限不让它超过而已，但是它自己确实是会慢慢增大的。我们这有个专门做核酸的实验室，他们跑跟我一样条件，只有染料不一样的情况下，电流也是有100多mA。琼脂糖的浓度感觉应该不是主要问题，浓度太低会造成弥散么？ 2010-04-27 19:43
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1、首先是恒压电泳，没听说变压跑电泳的。 2、其次是电流恒定，100伏电压要用到110mA的电流吗？电流太高了... 通常用120V，50mA足够（当然是根据胶、电泳槽等大小而适当调整）。 3、染料的话，当然还是EB好，不过致癌的。其他染料也行，比如我们现在用GELRED，中文是荧光泰，跑电泳效果也不错，据说没毒，不过价格对得起人。 4、胶的浓度有点小了，偶们通常用1%琼脂糖。根据你的片段大小做调整。 [ Last edited by poog502 on 2010-4-27 at 16:41 ] |
8楼2010-04-27 16:38:23
9楼2010-04-27 16:53:39
lyg7720349
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