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cpn

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】难看的琼脂糖电泳谱图已有8人参与

最近跑的琼脂糖电泳谱图奇丑无比。

用的别人的1*TAE，0.7%Agarose，100V恒压跑半个小时（电流从110mA增大到最后140mA）。
染料是一个国产的牌子，Genefinder，预加在胶里的。
琼脂糖用的biowest。
图上两个条带都是marker，最右边是1kb的marker，往左是hind III lambda DNA marker（Takara的）。
条带都有不同程度拖尾变形，1kb marker的条带看上去还有些弥散。
怎样改善？非常感谢！

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1楼2010-04-26 21:10:22

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poog502

木虫 (正式写手)

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cpn(金币+1):biorad的电泳仪，电流我只是设了个上限不让它超过而已，但是它自己确实是会慢慢增大的。我们这有个专门做核酸的实验室，他们跑跟我一样条件，只有染料不一样的情况下，电流也是有100多mA。琼脂糖的浓度感觉应该不是主要问题，浓度太低会造成弥散么？ 2010-04-27 19:43

1、首先是恒压电泳，没听说变压跑电泳的。
2、其次是电流恒定，100伏电压要用到110mA的电流吗？电流太高了...
通常用120V，50mA足够（当然是根据胶、电泳槽等大小而适当调整）。
3、染料的话，当然还是EB好，不过致癌的。其他染料也行，比如我们现在用GELRED，中文是荧光泰，跑电泳效果也不错，据说没毒，不过价格对得起人。
4、胶的浓度有点小了，偶们通常用1%琼脂糖。根据你的片段大小做调整。

[ Last edited by poog502 on 2010-4-27 at 16:41 ]