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cpn

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】难看的琼脂糖电泳谱图 已有8人参与

最近跑的琼脂糖电泳谱图奇丑无比。

用的别人的1*TAE,0.7%Agarose,100V恒压跑半个小时(电流从110mA增大到最后140mA)。
染料是一个国产的牌子,Genefinder,预加在胶里的。
琼脂糖用的biowest。
图上两个条带都是marker,最右边是1kb的marker,往左是hind III lambda DNA marker(Takara的)。
条带都有不同程度拖尾变形,1kb marker的条带看上去还有些弥散。
怎样改善?非常感谢!
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poog502

木虫 (正式写手)

cpn(金币+1):biorad的电泳仪,电流我只是设了个上限不让它超过而已,但是它自己确实是会慢慢增大的。我们这有个专门做核酸的实验室,他们跑跟我一样条件,只有染料不一样的情况下,电流也是有100多mA。琼脂糖的浓度感觉应该不是主要问题,浓度太低会造成弥散么? 2010-04-27 19:43
1、首先是恒压电泳,没听说变压跑电泳的。
2、其次是电流恒定,100伏电压要用到110mA的电流吗?电流太高了...
通常用120V,50mA足够(当然是根据胶、电泳槽等大小而适当调整)。
3、染料的话,当然还是EB好,不过致癌的。其他染料也行,比如我们现在用GELRED,中文是荧光泰,跑电泳效果也不错,据说没毒,不过价格对得起人。
4、胶的浓度有点小了,偶们通常用1%琼脂糖。根据你的片段大小做调整。

[ Last edited by poog502 on 2010-4-27 at 16:41 ]
8楼2010-04-27 16:38:23
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)


1949stone(金币+1): 2010-04-26 21:48
cpn(金币+1):那如果条带都扭曲掉像蚯蚓一样呢?会不会也是电源的问题? 2010-04-26 22:08
哈哈,你的电压不稳啊,时高时低,就会出现带跑歪的。并且电压太高时就会出现你图中的smear
2楼2010-04-26 21:19:11
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)


1949stone(金币+1): 2010-04-26 21:48
cpn(金币+1):是用恒流跑么?电压是不变的,但电流一直增大。 2010-04-26 22:03
至于你的电泳材料一般不会有太大问题的,你现在的关键是把电压(100v)及电流稳住,你的带就会很清晰了,不信你就试试吧,呵呵
3楼2010-04-26 21:24:43
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fxy0570

金虫 (正式写手)


1949stone(金币+1): 2010-04-26 21:49
cpn(金币+1):谢谢!我明天试看看 2010-04-26 22:07
电压不要太高,还有要稳定,我们一般就跑80V的就行了。
4楼2010-04-26 21:42:07
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