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cpn

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】难看的琼脂糖电泳谱图 已有8人参与

最近跑的琼脂糖电泳谱图奇丑无比。

用的别人的1*TAE,0.7%Agarose,100V恒压跑半个小时(电流从110mA增大到最后140mA)。
染料是一个国产的牌子,Genefinder,预加在胶里的。
琼脂糖用的biowest。
图上两个条带都是marker,最右边是1kb的marker,往左是hind III lambda DNA marker(Takara的)。
条带都有不同程度拖尾变形,1kb marker的条带看上去还有些弥散。
怎样改善?非常感谢!
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liyong1981

金虫 (正式写手)


cpn(金币+2):其实我也怀疑是染料的问题,我们实验室不止我,没人跑出好看的条带。但其它实验室用EB跑出来的就很好。 2010-04-27 15:51
cpn(金币+5):确实是用的genefinder染料的问题,加在胶里跑似乎对胶的影响很大,改用预染后上样,效果就改善很多了,不过条带亮度就暗了不少,marker里最大的片段似乎有点轻微的弥散。 2010-05-01 21:14
cpn: 回帖置顶 2012-08-13 15:07:47
我估计很有可能是染料的问题,我以前也用过什么花青素之类的,跑出来很难看,怀疑了很多,最后用EB,一切正常了,所以说,还是EB好,其他的像sybergreen,也还好,就是很贵,其实也有毒。
6楼2010-04-27 08:56:17
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)


1949stone(金币+1): 2010-04-26 21:48
cpn(金币+1):那如果条带都扭曲掉像蚯蚓一样呢?会不会也是电源的问题? 2010-04-26 22:08
哈哈,你的电压不稳啊,时高时低,就会出现带跑歪的。并且电压太高时就会出现你图中的smear
2楼2010-04-26 21:19:11
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)


1949stone(金币+1): 2010-04-26 21:48
cpn(金币+1):是用恒流跑么?电压是不变的,但电流一直增大。 2010-04-26 22:03
至于你的电泳材料一般不会有太大问题的,你现在的关键是把电压(100v)及电流稳住,你的带就会很清晰了,不信你就试试吧,呵呵
3楼2010-04-26 21:24:43
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fxy0570

金虫 (正式写手)


1949stone(金币+1): 2010-04-26 21:49
cpn(金币+1):谢谢!我明天试看看 2010-04-26 22:07
电压不要太高,还有要稳定,我们一般就跑80V的就行了。
4楼2010-04-26 21:42:07
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