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zfy9715

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助】请问蛋白电泳的原料应该怎么处理？

请问一下，我想测一下大豆蛋白的分子量图谱，但是样品不纯，是不是得先处理一下啊？O(∩_∩)O谢谢

[ Last edited by lovibond on 2011-10-2 at 21:54 ]
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1楼 2011-01-11 10:40:13
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liuzhilong676

金虫 (小有名气)
我以前读硕士的时候做过几次，回去帮你找找资料。
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2楼2011-01-11 11:24:04
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zfy9715

木虫 (小有名气)
谢谢你啊，谢谢
引用回帖:
Originally posted by liuzhilong676 at 2011-01-11 11:24:04:
我以前读硕士的时候做过几次，回去帮你找找资料。

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3楼2011-01-11 19:31:20
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locy

木虫 (正式写手)
★
树树8013(金币+1):谢谢locy参与讨论，欢迎常来食品板块~ 2011-01-11 22:15:24
电泳之前  样品肯定要纯化啊  如果纯度太低的话  跑电泳就没有必要了   纯化后算出大概浓度   跟缓冲液混合 当然可以用不同的缓冲液 如添加SDS或者巯基乙醇啊   然后对比分析结果
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4楼2011-01-11 21:17:54
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zfy9715

木虫 (小有名气)
请问一般用什么方法纯化啊？
引用回帖:
Originally posted by locy at 2011-01-11 21:17:54:
电泳之前  样品肯定要纯化啊  如果纯度太低的话  跑电泳就没有必要了   纯化后算出大概浓度   跟缓冲液混合 当然可以用不同的缓冲液 如添加SDS或者巯基乙醇啊   然后对比分析结果

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5楼2011-01-11 22:22:52
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liuzhilong676

金虫 (小有名气)
★
lovibond(金币+1):感谢交流 2011-01-12 10:17:57
十二烷基磺酸钠- 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)参照Laemmli方法。分离胶浓度为12%(质量分数，下同)，浓缩胶浓度为5%。 电泳前将已和样品缓冲液混合的样品煮沸5 min， 上样量为10μL，凝胶电泳于恒流下进行，在浓缩胶中电流为40mA，进入分离胶后增至80mA. 凝胶染色液用含有0.25%的考马斯亮蓝R-250，脱色用高甲醇的醋酸溶液，甲醇/冰醋酸/水的体积比为1∶1∶8。凝胶染色及脱色后，于凝胶成像系统进行成像处理。
参考文献：Laemmli, U. K. (1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227, 680–685.
我当时也是做大豆蛋白，现在不记得样品前处理方法了，你看一下文献有没有
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6楼2011-01-12 10:16:55
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liuzhilong676

金虫 (小有名气)
★
lovibond(金币+1):鼓励交流 2011-01-12 11:57:57
纯化是需要的，尽量越纯越好，要不然会跑出很多条杂带，文献上都会有大豆蛋白的谱带。分离蛋白一般都是用碱溶酸沉的方法来制备吧。
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7楼2011-01-12 10:22:48
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locy

木虫 (正式写手)
★
树树8013(金币+1):谢谢对主题的关注，欢迎常来食品板块 2011-01-12 14:43:40
引用回帖:
Originally posted by zfy9715 at 2011-01-11 22:22:52:
请问一般用什么方法纯化啊？

纯化要根据你目标产物的特性了 分子大小与其他组分亲和性  电荷 疏水性等  可以用很多方法了  分级沉淀啊  透析啊 膜分离啊 凝胶过滤色谱分离啊 亲和层析   然后跑电泳  一方面可以检测纯度   一方面只要达到电泳纯可以拿条带做序列分析了
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8楼2011-01-12 13:33:26
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