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zfy9715

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助】请问蛋白电泳的原料应该怎么处理?

请问一下,我想测一下大豆蛋白的分子量图谱,但是样品不纯,是不是得先处理一下啊?O(∩_∩)O谢谢

[ Last edited by lovibond on 2011-10-2 at 21:54 ]
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liuzhilong676

金虫 (小有名气)


★
lovibond(金币+1):感谢交流 2011-01-12 10:17:57
十二烷基磺酸钠- 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)参照Laemmli方法。分离胶浓度为12%(质量分数,下同),浓缩胶浓度为5%。 电泳前将已和样品缓冲液混合的样品煮沸5 min, 上样量为10μL,凝胶电泳于恒流下进行,在浓缩胶中电流为40mA,进入分离胶后增至80mA. 凝胶染色液用含有0.25%的考马斯亮蓝R-250,脱色用高甲醇的醋酸溶液,甲醇/冰醋酸/水的体积比为1∶1∶8。凝胶染色及脱色后,于凝胶成像系统进行成像处理。
参考文献:Laemmli, U. K. (1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227, 680–685.
我当时也是做大豆蛋白,现在不记得样品前处理方法了,你看一下文献有没有
6楼2011-01-12 10:16:55
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liuzhilong676

金虫 (小有名气)


我以前读硕士的时候做过几次,回去帮你找找资料。
2楼2011-01-11 11:24:04
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zfy9715

木虫 (小有名气)


谢谢你啊,谢谢
引用回帖:
Originally posted by liuzhilong676 at 2011-01-11 11:24:04:
我以前读硕士的时候做过几次,回去帮你找找资料。

3楼2011-01-11 19:31:20
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locy

木虫 (正式写手)


★
树树8013(金币+1):谢谢locy参与讨论,欢迎常来食品板块~ 2011-01-11 22:15:24
电泳之前  样品肯定要纯化啊  如果纯度太低的话  跑电泳就没有必要了   纯化后算出大概浓度   跟缓冲液混合 当然可以用不同的缓冲液 如添加SDS或者巯基乙醇啊   然后对比分析结果
4楼2011-01-11 21:17:54
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