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魏慧芳

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问哪位高手用琼脂糖电泳跑过蛋白？

我用琼脂糖跑蛋白，条带总是拖尾，染色后条带前沿和加样槽之间形成蓝色的一片，长方形，这是为什么呢？还不像正常的拖尾，求高手指教！！！
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1楼 2012-02-08 21:51:24
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rainblue007

金虫 (小有名气)
小丹木木(金币+3): 鼓励应助 2012-02-16 13:33:46
引用回帖:
7楼: Originally posted by 魏慧芳 at 2012-02-10 14:07:17:
太感谢了！我有一种蛋白，在pH8.6的时候，理论上应该带正电，跑向阴极，可我做的总是跑向阳极，实在想不出为什么？求指点！

琼脂糖-蛋白电泳，如果需要样品带负电，处理时也会加一定量的SDS。像你这种情况，需要的是样品带正电，那就千万不能加SDS，或者有类似功能的试剂，你好好检查一下你的上样缓冲液、电泳缓冲液成分的和pH，需要严格控制，有条件的话一定要用准确度高的pH计，pH试纸就算了，太不准了。祝好运！
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8楼2012-02-16 09:39:08
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lynni

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+3): 鼓励应助 2012-02-09 13:35:37
一般使用琼脂糖凝胶电泳的都是DNA，电泳驱动力靠的是DNA骨架本身的负电荷。蛋白质电泳（一般指SDS-PAGE）一般使用的都是聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。都是负电荷，所以这两个电泳体系可以互相交换使用。进行大分子蛋白质电泳时，可以考虑换用琼脂糖凝胶，因为该体系孔径大。出现上述情况，是不是因为蛋白不够大根本跑不开？~~
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淘喜欢的一切
2楼2012-02-09 00:16:08
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lixingliang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么蛋白要用琼脂糖凝胶电泳来跑呢，我们都是用的聚丙烯酰胺凝胶电泳，建议尝试一下
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
3楼2012-02-09 08:01:50
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hxwhu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助哦 2012-02-10 13:38:29
样品要一样处理哦，加SDS加还原剂，缓冲液不能用TAE吧，要tris-glycine缓冲体系的，总之，感觉很怪，难道你不会做块垂直胶吗，琼脂糖胶那么厚，不好染不好脱
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4楼2012-02-09 13:54:17
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