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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE跑不出带
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liaoailing

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-07-05 16:46:26
maker都没有出来有可能是胶的问题。样品中的盐含量和离子含量过高的话也会影响。我以前的样品中盐含量过高也是没有条带，透析除盐后就好了。
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11楼2010-07-05 16:35:06
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evebobo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对 之前一定要脱盐
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12楼2010-07-05 16:38:31
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
加蛋白质太少了，marker也加得太少了
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2010-07-05 18:22:59
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~希望对楼主有所帮助~· 2010-07-12 13:13:27
固定液里的甲醇如果加到染色液里就不用单独固定了。

染色液如果是反复用的，G250太稀了即使是染再久也不会看的到条带。

脱色液不换的话，即使是没有蛋白质的地方也还是蓝色的，脱色过夜也还是一片蓝色。

mark可能是别人配得不好，浓度不对。酶液即使是有酶活力，蛋白质不够多也是看不出条带的。

43kd那么大，即使溴酚兰刚好跑出去也还是不会跑出去的，除非带电荷非常大，对泳速的影响比分子量还大。这个要看蛋白质的PI值和电泳液的pH值。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
14楼2010-07-05 18:29:02
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jqq1985

银虫 (正式写手)
染色液可能不好用了，建议重新配一下。
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15楼2010-07-09 10:58:55
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肽之

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
脱色时间没问题的，我经常脱一个晚上
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16楼2010-07-09 17:12:53
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caoyi0810

新虫 (小有名气)
★
lstt09nk(金币+1):感谢交流~ 2010-07-12 13:13:56
应该是胶的问题吧。。。
可以重新配下配胶的溶液。。。
跑的时候别让条带跑出头了
另外，酶液可以浓缩下再跑，因为考马斯亮蓝的灵敏度不是很高
如果酶量少，可以考虑 用银染。。。
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伪小资要花粪涂墙~
17楼2010-07-12 10:18:26
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刘小乐

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):鼓励新虫交流~~ 2010-07-12 13:14:09
1、把分离胶的浓度配高点吧，配到12%分离效果好点。浓缩胶5%就可以的。
2、考马斯亮蓝的吸附能力很强的，过夜脱色很正常，不会因为这个原因的。
3、可能是样品浓度太低，建议浓缩下上样。
4、考马斯亮蓝会不会用是次数太多了？染不上色了，这个原因感觉要大一点，因为marker没条带。
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互动互利互相学习
18楼2010-07-12 13:11:36
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白格子衬衫

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
脱色时间太长了吧
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未及热爱，已然离开
19楼2010-07-12 13:32:25
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crren

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们之前也出现过类似问题，估计很可能是制胶的问题，还有电极缓冲液的问题，也可能是上样缓冲液出了问题吧，DTT是不是挥发了？
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20楼2010-07-26 15:17:56
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