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liby

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE跑不出带已有22人参与

我的目的蛋白大概是43KDa,我用了10%的分离胶，用考马斯亮蓝染色一个半小时，脱色一晚上，结果没带，marker都没出来，样品是我测过有酶活的发酵液。这是什么原因，请教各位

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1楼2010-07-03 09:12:25

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冼亮淀粉酶

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~希望对楼主有所帮助~· 2010-07-12 13:13:27

固定液里的甲醇如果加到染色液里就不用单独固定了。

染色液如果是反复用的，G250太稀了即使是染再久也不会看的到条带。

脱色液不换的话，即使是没有蛋白质的地方也还是蓝色的，脱色过夜也还是一片蓝色。

mark可能是别人配得不好，浓度不对。酶液即使是有酶活力，蛋白质不够多也是看不出条带的。

43kd那么大，即使溴酚兰刚好跑出去也还是不会跑出去的，除非带电荷非常大，对泳速的影响比分子量还大。这个要看蛋白质的PI值和电泳液的pH值。