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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
天yi: 金币+2 2012-05-09 19:44:35
可能同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
其对策有：①必要时重新设计引物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。
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11楼2012-05-08 23:18:50
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 329181203lin at 2012-05-08 21:14:21:
胶浓度是指？

比如你本来是1%的琼脂糖胶，可以适当加大到1.2%或1.5%
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12楼2012-05-09 22:02:46
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moshangchenx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

样品不纯，胶的浓度也有问题，引物设计的也不好
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科研无止境，我心成蹉跎
13楼2012-12-25 20:23:54
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