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天yi

铜虫 (小有名气)

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[求助] PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧

PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧，多谢了！

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1楼 2011-12-05 22:27:25

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凌波丽

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【答案】应助回帖

★ ★
天yi: 金币+2 2012-05-09 19:44:35

可能同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
其对策有：①必要时重新设计引物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。