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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧
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天yi

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧

PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧，多谢了！
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1楼 2011-12-05 22:27:25
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
天yi: 金币+2 2012-05-09 19:44:35
可能同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
其对策有：①必要时重新设计引物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。
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11楼2012-05-08 23:18:50
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

天yi(金币+1): 2011-12-06 08:08:38
DNA 模板可能纯度不够，杂质干扰。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-12-06 01:00:30
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籽沐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

天yi(金币+1): 2011-12-06 12:28:51
用不含DNA酶的RNA酶处理一下，后面拖尾的亮的可能是RNA
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3楼2011-12-06 09:26:17
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
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4楼2011-12-06 09:29:00
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