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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮忙分析一下PCR电泳图
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piggpi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zxy7576 at 2011-04-22 13:22:19:
第四道不加模板的空对照都那么多条带，有可能是你提取的RNA有问题，建议重新提取；
染料对迁移率的影响应该是一样的呀，你那几个条带不在同一位置，有可能是你胶做的有问题，胶孔不一致；也有可能是其实那几个根 ...

谢谢啦！RNA不纯或者提取效果不好比较赞同这个说法。
现在从琼脂凝胶回收DNA，测了下纯度，A260/280竟然2.1多，而且浓度也不高，先PCR看看结果怎样。再考虑重提。
但是请问“第四道不加模板的空对照都那么多条带，有可能是你提取的RNA有问题”这怎么说？里面没有模板啊
还有染料对迁移率的影响具体是怎么样的？不一样怎么说？
我是新手，刚开始做实验，很多不懂，别见怪！
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在很久很久以前
11楼2011-04-22 17:17:05
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zxy7576

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

piggpi(金币+2): 2011-04-25 11:21:18
其实迁移率并不是很重要对于你的实验来说，但是你问了这个问题，我就找了找答案：DNA电泳的迁移率跟一下几个因素有关：DNA的分子大小及构型：不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）>直线DNA>开环的双链环状DNA。
琼脂糖浓度，这个你知道的吧；
电源电压，不要把电压加的太大；
然后就是你关心的荧光染料溴化乙啶了，用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA，使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低15％。不过个人认为这个影响真的没什么的，甚至可以忽略。
还有离子强度影响。

我说的那个没有模板的空白对照，就是说没有任何其他RNA或DNA的加入的空白对照，呵呵~
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不论什么时候，什么处境，都不要忘记自己最初的梦想！
12楼2011-04-25 10:05:39
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piggpi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zxy7576 at 2011-04-25 10:05:39:
其实迁移率并不是很重要对于你的实验来说，但是你问了这个问题，我就找了找答案：DNA电泳的迁移率跟一下几个因素有关：DNA的分子大小及构型：不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA（covalently closed circu ...

学习了。。。。。谢谢啦
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在很久很久以前
13楼2011-04-25 11:28:24
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快乐酒僧

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by piggpi at 2011-04-21 12:27:47
如图：
第一泳道是50bp的M，第4道是不加模板空对照，第5道所用引物为重新稀释的
第4道也有多条条带，那就是说引物肯定污染了。是这样吗？
还有学姐的意思是说后面四道上面的亮带是一样的，是染料对迁移率有影响。 ...

请问 空白对照 出现亮带 是不是说 必然污染了啊 我都是DNA没做rna 故问
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14楼2013-04-07 17:45:09
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bingxi556

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 快乐酒僧 at 2013-04-07 17:45:09
请问 空白对照 出现亮带 是不是说 必然污染了啊 我都是DNA没做rna 故问...

我也想知道，不加模板的空白对照，出现和目的条带相同大小的带，是不是一定是引物或者是体系里面的某种试剂污染了，
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15楼2014-03-18 10:46:28
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