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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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piggpi

金虫 (小有名气)

[求助] 大家帮忙分析一下PCR电泳图

提鳗鱼总RNA后直接RT,接下来的PCR电泳结果如图。
我要的条带在330bp。可基本是非特异性条带。
我做的是小清蛋白克隆,以前克隆其他鱼的时候也是用同样的引物,以前没这种情况出现,有没有可能是引物降解了?
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在很久很久以前
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piggpi

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zxy7576 at 2011-04-22 13:22:19:
第四道不加模板的空对照都那么多条带,有可能是你提取的RNA有问题,建议重新提取;
染料对迁移率的影响应该是一样的呀,你那几个条带不在同一位置,有可能是你胶做的有问题,胶孔不一致;也有可能是其实那几个根 ...

谢谢啦!RNA不纯或者提取效果不好比较赞同这个说法。
现在从琼脂凝胶回收DNA,测了下纯度,A260/280竟然2.1多,而且浓度也不高,先PCR看看结果怎样。再考虑重提。
但是请问“第四道不加模板的空对照都那么多条带,有可能是你提取的RNA有问题”这怎么说?里面没有模板啊
还有染料对迁移率的影响具体是怎么样的?不一样怎么说?
我是新手,刚开始做实验,很多不懂,别见怪!
在很久很久以前
11楼2011-04-22 17:17:05
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): good 2011-04-20 17:16:36
piggpi(金币+2): 感谢参与!!! 2011-04-21 10:22:01
你把引物做个空对照试试,就是不加模板,另外把退火温度提高点再扩增试试
在等待中涅槃重生
2楼2011-04-20 16:20:52
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
Originally posted by piggpi at 2011-04-20 16:18:10:
提鳗鱼总RNA后直接RT,接下来的PCR电泳结果如图。
我要的条带在330bp。可基本是非特异性条带。
我做的是小清蛋白克隆,以前克隆其他鱼的时候也是用同样的引物,以前没这种情况出现,有没有可能是引物 ...

看不到图片……不知道是不是我的问题……
3楼2011-04-20 17:17:16
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piggpi

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-20 16:20:52:
你把引物做个空对照试试,就是不加模板,另外把退火温度提高点再扩增试试

我去试试。。。。
在很久很久以前
4楼2011-04-20 18:40:35
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