应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求帮忙分析一下关于PCR产物电泳图片
71/1返回列表
查看: 1765  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

[求助] 求帮忙分析一下关于PCR产物电泳图片 已有1人参与

本来打算做巢式PCR，设计了两对引物，可是做出来之后看电泳结果反而不如之前用一对引物的明显了···

一个是先用外侧正反引物做touch down，产物作为模板，用内侧正反引物进行PCR；
另一个是直接用内侧的正反引物做个touch down然后用产物做模板进行PCR

另外，分别用三种不同的海参组织cDNA做模板进行实验（肠道、体壁、呼吸树）


小弟是个刚开始学分子生物学的新手，希望能帮忙分析一下出现这种现象的原因是什么呢？
为什么第二个体壁的电泳条带是那样的呢？
前面三个是不是除了引物二聚体还有别的东西在里面呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-27 20:32:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bwangel

银虫 (小有名气)
图不见
回复此楼
2楼2014-09-28 08:22:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-09-28 09:26:50
首先，可以试试目的引物直接PCR，调整好条件，既然你说“可是做出来之后看电泳结果反而不如之前用一对引物的明显了”，说明这样应该是可行的，只是条件没有优化。
其次，并不是touch down就一定比正常的PCR要好，只有后者实在行不通才试用touch down。
另外，可以先用外侧引物直接扩增，检验其产物，然后回收，再以其为模板扩增目的产物，因为如果直接在体系中加2对引物也可能会引起错配。
最后，检查一下cDNA质量。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-09-28 09:14:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdjnyxn123

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cuihao102 at 2014-09-28 09:14:23
首先，可以试试目的引物直接PCR，调整好条件，既然你说“可是做出来之后看电泳结果反而不如之前用一对引物的明显了”，说明这样应该是可行的，只是条件没有优化。
其次，并不是touch down就一定比正常的PCR要好，只 ...

非常感谢您的回答！
请问电泳图片体壁的那一条为什么会出现那样的情况呢？后面三个好像只有引物二聚体的感觉，那么左边的是不是说很可能有目的片段在里面了呢？
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-28 17:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
sdjnyxn123(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:53
不知道你目的产物是多大，看着像是有东西，但也有可能是杂带！如果想确定的话再P一次，重跑一下看看是不是还是这样。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-09-28 18:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狼王啊

铁虫 (初入文坛)
第二次PCR时，把第一次PCR的产物稀释一下做模板，试一试？？
赞一下 回复此楼
6楼2014-09-30 20:45:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdjnyxn123

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 狼王啊 at 2014-09-30 20:45:41
第二次PCR时，把第一次PCR的产物稀释一下做模板，试一试？？

之前问了下老师，老师还是让做巢式PCR，但是外侧引物的PCR体系用AD酶替代了r-Taq，最后的电泳结果居然出条带了···当然，还是感谢你的回答！
赞一下 回复此楼
7楼2014-10-02 19:02:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sdjnyxn123 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭