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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR电泳总是跑成狗骨头的样子，求大神帮忙找找原因哦
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莫伊2013

银虫 (小有名气)

[求助] PCR电泳总是跑成狗骨头的样子，求大神帮忙找找原因哦 已有9人参与

PCR电泳参数：电压120V 跑30Min
50XTAE 配制方法：   1. 称量Tris 242g，Na2EDTA·2H2O  37.2g 于1L烧杯中；   2.向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌均匀；   3加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解；   4.加去离子水定容至1L后，室温保存
50X的TAE稀释成1X的TAE备用
制胶是0.25g琼脂糖 25mL1XTAE 微波溶解8次 凝胶20Min
我跑的电泳图如下，请大家帮忙分析分析

PCR电泳总是跑成狗骨头的样子，求大神帮忙找找原因哦
Administrator 2014-08-18 17 时 18 分.jpg
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1楼 2014-08-18 17:34:19
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owl2010

金虫 (正式写手)
不知道你PCR扩增的片段有多大，从图上看应该是引物二聚体，表明引物在模板内没有得到扩增。
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男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
2楼2014-08-18 18:19:54
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wangranjun

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广庭之惘然

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莫伊2013(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-19 16:56:22
通常情况下出现这种条带可能是目的片段浓度高上样多，所以可以减少上样试一下。可以提高胶浓度，高浓度的胶跑出来的条带可能会好一些。我同样感觉你的片段是引物二聚体……
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
3楼2014-08-18 19:17:42
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wangranjun

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8楼: Originally posted by 莫伊2013 at 2014-08-19 10:33:45
我把胶的浓度提高了 但是还是有点像狗骨头的样子 师兄帮我分析下啊

Administrator 2014-08-19 10 时 34 分.jpg
...

电压降一下，降到100V，电压高的话可能会这样子的。TAE都是最近配的吗？
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
9楼2014-08-19 12:46:33
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莫伊2013

银虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by owl2010 at 2014-08-18 18:19:54
不知道你PCR扩增的片段有多大，从图上看应该是引物二聚体，表明引物在模板内没有得到扩增。

我的引物片段就100多PB 这个是内参基因用来跑QPCR的
我做一下RTPCR给实验做个补充
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4楼2014-08-18 19:48:07
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莫伊2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangranjun at 2014-08-18 19:17:42
通常情况下出现这种条带可能是目的片段浓度高上样多，所以可以减少上样试一下。可以提高胶浓度，高浓度的胶跑出来的条带可能会好一些。我同样感觉你的片段是引物二聚体……

我的引物片段就100多PB 这个是内参基因用来跑QPCR的
我做一下RTPCR给实验做个补充
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5楼2014-08-18 19:48:13
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 莫伊2013 at 2014-08-18 19:48:13
我的引物片段就100多PB 这个是内参基因用来跑QPCR的
我做一下RTPCR给实验做个补充...

哦，这样子就对了！条带蛮干净的！可以用2%的琼脂糖凝胶跑一下，应该会更漂亮一些，你的Marker不好看，没跑开
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
6楼2014-08-18 19:58:44
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莫伊2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wangranjun at 2014-08-18 19:58:44
哦，这样子就对了！条带蛮干净的！可以用2%的琼脂糖凝胶跑一下，应该会更漂亮一些，你的Marker不好看，没跑开...

嗯，明天我准备120V跑40分钟 这样mark应该能跑开 希望不会再出现狗骨头的状况 QPCR跑的很好 RTPCR反而跑不好了
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7楼2014-08-18 20:24:36
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莫伊2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wangranjun at 2014-08-18 19:58:44
哦，这样子就对了！条带蛮干净的！可以用2%的琼脂糖凝胶跑一下，应该会更漂亮一些，你的Marker不好看，没跑开...

我把胶的浓度提高了 但是还是有点像狗骨头的样子 师兄帮我分析下啊
PCR电泳总是跑成狗骨头的样子，求大神帮忙找找原因哦-1
Administrator 2014-08-19 10 时 34 分.jpg
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8楼2014-08-19 10:33:45
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bwangel

银虫 (小有名气)

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莫伊2013(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-19 16:55:59
你这个是多少大的marker啊，100bp的带，用500的marker跑，100V，2%的胶，记得胶溶的彻底点，怎么样都能跑出来，别用你那个marker了，
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10楼2014-08-19 13:53:04
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